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silvi-civi
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2011 : 15:14:34

salve a tutti,
non ho mai usato un eletroporatore per cui � tutto un p� nuovo.
dovrei trasfettare delle RCS (sono dei condrociti)...qualcuno le ha mai trasfettate?suggerimenti sui protocolli da utilizzare?
grazie

Citosina
Nuovo Arrivato

Citt�: Milano

73 Messaggi

Inserito il - 03 novembre 2011 : 13:06:59

Io quando l'ho usato ho sempre cercato i protocolli in letteratura. Oppure se provi a guardare sui siti di grandi fornitori (tipo invitrogen o lo stesso della marca del tuo elettroporatore), in genere vendono i kit su misura per il tipo cellulare. Io avevo usato il kit seguendo i passaggi alla lettera e il tutto aveva funzionato.

A grandi linee, ti posso dire che il procediemnto non � particolarmente complesso. Una volta che hai stabilito la quantit� di DNA da utilizzare (in genere viene consigliata dal kit), si procede creando un soluzione contente un mix delle due soluzioni contenute nel kit. In seguito aggiungi il DNA. Risospendi le cellule in questa soluzione ed elettropori. L'elettroporazione in s� dura una manciata di secondi, � proprio rapida rapida. Le uniche precauzioni da prendere sono 1) considerare che le cellule dopo elettroporazione sono stressate per cui una volta elettropare bisogna rimuovere con delicatezza il surnatante, aspirare le cellule e piastrarle direttamente nel terreno oppurtuno in piastra (meglio avere tutto gi� preriscaldato).

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 03 novembre 2011 : 13:12:23

Non dovrebbero essere troppo diverse dai fibroblasti, come transfettabilit�!
Io userei un protocollo per fibroblasti e poi magari proverei a ottimizzarlo...

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

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