ddH2O per purificazione PBMCs

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Autore

Discussione

Roberto De Masi
Nuovo Arrivato

Prov.: Italy/Lecce/Puglia
Città: Casarano

4 Messaggi

Inserito il - 02 novembre 2011 : 09:45:40

Ciao a tutti
torno ad esporre un quesito: quando estraggo i PBMC (la solita centrifug su ficol) spesso mi viene contaminazione con eritrociti. So che per mecc osmatico li si potrebbe lisare con la semplice ddH2O, ma non ho idea dei tempi di incubaz.
AIUTATEMI!
mille grazie.

Roberto

Dionysos
Moderatore

Città: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 03 novembre 2011 : 12:58:24

PBMC umani o murini? il tempo è diverso!

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

memole
Utente Junior

Prov.: Brindisi
Città: brindisi

577 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2011 : 11:01:44

Se parli di umani puoi provare a lisare le emazie con una soluzione di NH4Cl 0,4% (w/v) pH 7.4 preparata in Tris HCl 50 mM per 10 minuti. Io facevo così, ma se puoi evitala perchè comunque ti stressa le cellule.

Daria85
Utente

678 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2011 : 11:20:57

io faccio semplicemente una lisi di 1min cn 1ml ddH2O, spipettando molto lentamente.
finito il minuto metto PBS e centrifugo.
ciao