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valeriamassa
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: milano
64 Messaggi |
 Inserito il - 28 novembre 2006 : 20:15:13
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Ciao!
Qualcuno sa consigliarmi una ligasi che funzioni e la ditta produttrice? Ultimamente nel nostro lab non vengono più le ligazioni, è un vero mistero il motivo, semplicemente non vengono,non è un problema di cellule competenti perchè trasformando vettori chiusi si ottiene un tappeto di colonie. Siamo disperati, riteniamo che probabilmente sia un problema di acqua, qualcuno sa indicarmi possibili soluzioni al problema?
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valeria |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 28 novembre 2006 : 22:04:10
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Guarda, noi qui usiamo Invitrogen x tutto quanto riguardi la biologia molecolare. Purtroppo non facciamo ligazioni, quindi non ti saprei dire...
Io farei piccoli controlli quali: usare aliquote nuove di tutti i reagenti, magari prendere proprio uno stock nuovo. Controllare pH dell'acqua, fare un po' di prove con varie concentrazioni di Mg... |
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Anyra
Utente Junior
Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara
212 Messaggi |
Inserito il - 29 novembre 2006 : 11:44:25
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Penso che il consiglio di chick80 sia corretto. in verità tutti i prodotti in commercio funzionano magari ci sono piccole variazioni sull'efficenza ma più o meno la ligasi non richiede particolari accorgimenti.
Che tipo di prodotti hai da ligare? prodotti di PCR (Per se TA cloning ) oppure un prodotto di digestione?
il buffer della ligasi contiene ATP, se rimane troppo tempo a RT si potrebbe rovinare.
Per risolvere il problema dell'acqua puoi provare con una fialetta di acqua iniettabile, la trovi in farmacia, costa pochi euro sono ca 6 ml (devi chiedere appunto quella per ricostituire i farmaci in polveri da iniettare (è un acqua endotoxin free che noi usavamo per le PCR quando non avevamo l'acqua milliQ)
Ciao |
Il mio Cavaliere
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