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GuancY90
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 05 dicembre 2011 : 19:20:50

Salve a tutti! sono una studentessa di biotecnologie e ho questo dubbio..nel dosaggio enizmatico dell'enzima con il metodo spettrofotometrico devo prima effettuare una lettura allo spettrofotometro con la soluzione priva dell'enzima o devo aggiungere SUBITO l'enzima e quindi effettuare la lettura?? mettendo subito l'enzima perdo la linearit� del primo tratto della curva del grafico assorbanza/tempo(che mi interessa per calcolare il delta di assorbanza per l'attivit� enzimatica)?? e nel caso del dosaggio del substrato??aggiungo subito il substrato o dopo la prima lettura??
Grazie!!

maribiotec
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2012 : 20:51:02

Nel dosaggio enzimatico devi effettuare entrambe le misurazioni dopo aver aggiunto l'enzima con una concentrazione di substrato saturante(in modo che la velocit� di reazione sia costante), nel dosaggio del substrato la prima misurazione va effettuata senza enzima.

Martin.diagnostica
Utente Attivo

1582 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2012 : 23:43:05

Citazione:
Messaggio inserito da GuancY90

..nel dosaggio enizmatico dell'enzima

Assolutamente evita di esprimerti cosi durante l'esame, prenderebbe una brutta piega, stai parlando della misura dell'attivit� enzimatica

Citazione:

devo prima effettuare una lettura allo spettrofotometro con la soluzione priva dell'enzima o devo aggiungere SUBITO l'enzima e quindi effettuare la lettura??

Io ho sempre misurare il bianco prima di mettere l'enzima, anche l'analizzatore multicanle che uso adesso misura il bianco e lo conserva in memoria (prima di mettere l'enzima).

Citazione:

mettendo subito l'enzima perdo la linearit� del primo tratto della curva del grafico assorbanza/tempo(che mi interessa per calcolare il delta di assorbanza per l'attivit� enzimatica)??

In realta x dosare l'attivit� enzimatica si deve calcolare il deltaA/t quindi potresti anche mette l'enzima dirattamente per� poi come punto iniziale convienen partire per es da 30 secondi (evitando il primo tratto) sebbene non vedo nessun vantaggio pratico

Citazione:

e nel caso del dosaggio del substrato??aggiungo subito il substrato o dopo la prima lettura??
Grazie!!

Il dosaggio del substrato (per es misura della glicemia) � un saggio �endpoint� dove si deve avere anche una retta di tarartura costruta utilizzando delle soluzioni standard. Anche in questo caso si f� una misura del bianco prima di aggiungere l'enzima

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GuancY90
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2012 : 12:43:57

Grazie mille per le risposte!!