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 tecnica di bandeggio RBA/RBG
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vihy_90
Nuovo Arrivato



14 Messaggi

Inserito il - 11 dicembre 2011 : 21:00:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di vihy_90 Invia a vihy_90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, ho provato a capirci qualcosa ma cercando su internet ho trovato poco e niente al riguardo, anche in inglese, quindi mi affido a voi... Allora tra i vari bandeggi cromosomici (QFQ,GTG ecc)ho trovato l' RBA/RBG. Da quello che ho capito si tratta di 2 bandeggi analoghi che utilizzano entrambi BUdR come analogo della timina e che a metà della fase S BUdR viene posta a contatto con le cells determinando il suo incorporamento a livello del nuovo DNA di sintesi.
La differenza tra i 2 sta nel fatto che nella seconda (RBG) si usa MTX per ottimizzare il bandeggio grazie alla sincronizzazione del ciclo e in piu al posto dell'arancio di oridina si usa il giemsa.
E fin qui mi sta bene. Quello che succede dopo non mi è chiarissimo.
Dopo l'aggiunta di BUdR per 4/5 h aggiungo la colchicina per determinare il blocco in metafase, pongo la soluzione in ipotonica fisso e coloro. E POIIII????Quel che so, ma di cui non sono affatto certa, è che aggiungo bisbenzimide (Hoechs) che è un fluorocromo che si intercala nel DNA a livello di A-T e se sovraeccitato con UV determina la rottura del legame e la formazione di nick (poi con riscaldamento a 60° i nick si staccano) e si ha un'estrazione del DNa a livello delle bande <G, con l'aggiunta poi del colorante (arancio o giemsa) si colorerà solo l'elica integra e cioè quella con G-C... Qualcuno sa dirmi se quello che ho scritto è corretto? Vi ringrazio davvero tanto in anticipo :(

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Città: Paris, VIIème arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 11 dicembre 2011 : 22:52:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao,
triplicare il thread non lo rende più importante, ma soltanto contro regolamento.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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vihy_90
Nuovo Arrivato



14 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2011 : 00:49:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di vihy_90 Invia a vihy_90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In realtà non sapevo in che sezione postarlo dal momento che erano tutte e tre sezioni attinenti al post.
Non intendevo attribuirgli piu importanza, solo avere una risposta esaustiva.
Per il resto mi scuso per l'inadempienza.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2011 : 08:15:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non c'è problema, ho cancellato i doppioni. Ora possiamo continuare qui (sorry, ma non so rispondere alla tua domanda).

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