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spino83
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 21 gennaio 2012 : 12:46:03

ciao ragazzi mi servirebbe un aiuto...non sono un esperto di western blot ma dovrei dimostrare che una proteina del cervello di mio interesse aumenta al crescere dell'et� del topo...quindi prelevo il cervello da topi alle varie et� da (embrione fino ad et� adulta) omogenizzo il tessuto leggo allo spettrofotometro in modo da caricare lo stesso contenuto proteico....effettivamente vedo su gel un incremento della proteina ma il problema � il normalizzatore (ho usato sia actina che tubulina) non risulta mai costante...se non � un problema tecnico cosa pui� essere successo ovviamente ho ripetuto l'esperimento varie volte e non sono mai riuscito ad avere un normalizzatore costante...grazie

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2012 : 23:30:34

Pu� sembrare una domanda stupida:
- come leggi allo spettrofotometro? Fai un dosaggio bradford? La curva dello standard come viene?

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

immetella
Nuovo Arrivato

Prov.: Pescara
Citt�: Pescara

32 Messaggi

Inserito il - 01 febbraio 2012 : 14:30:32

Concordo con domi84...controlla bene la quantizzazione....la tubulina e/o l'actina come variano? la banda del normalizzatore aumenta quando aumenta anche la banda della tua proteina d'interesse? questa secondo me � la domanda fondamentale perch� se � cos� l'aumento della proteina di tuo interesse non � reale (quindi oltre al problema dello spettrofotometro c'� il problema di quello che vuoi domostrare....)
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