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Agne_90
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
 Inserito il - 05 febbraio 2012 : 09:57:59
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ciao a tutti, sto cercando informazioni sulle blastocisti tetraploidi. mi spiego meglio: a lezione di genetica molecolare il professore ha parlato del knock out genico nel topo, l'obiettivo è ottenere eterozigoti dall'incrocio di una chimera, pox maschio, con un wt per ottenere eterozigoti x il knock out, ma non sono sempre sicura di ottenerli al primo colpo. in pratica il professore ha detto però che generando blastocisti tetraploidi ottengo eterozigotial primo passaggio, ma credo di non avere ben capito cosa siano e soprattutto perchè sono eterozigoti al primo passaggio, ha anche accennato al fatto che non sono chimere, ma solo eterozigoti..vabbè, spero possiate aiutarmi! grazie mille in anticipo!
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Agne |
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_ARY_
Nuovo Arrivato
Prov.: mi
Città: milano
81 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2012 : 16:46:39
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ciao,
premetto che non ho la risposta alla tua domanda, però provo a far chiarezza su alcune cose,nella speranza di esserti di aiuto.
La blastocisti tetraploide è una blastocisti con 4 volte il patrimonio genetico, quindi una 4n. per quel che so io condizioni tetraploidi non sono vitali,però se lo dice il tuo prof di genetica avrà le sue ragioni.
Vi ha introdotto le blastocisti, perchè per fare un topo KO si inoculano le blastocisti modificate geneticamente nell'utero di una topolina pseudogravida.
ora immagina di avere un topo A nero da cui togli la blastocisti e la modifichi
ora immagina di avere un topo B bianco è il topo che accoglie nel suo utero la blastocisti del topo A
quello che ottieni è un topo chimera con 2 diversi patrimoni genetici contemporaneamente.
se incroci la chimera con un topo bianco otterrai un eterozigote,un topo nero e un topo bianco e in base a quel che ti serve fai gli incroci necessari.
spero di esserti stata d'aiuto.se c'è qualcosa che non ti convince scrivimi. |
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Agne_90
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2012 : 19:01:05
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| -.-! oddio...credo di aver fatto confusione...cioè, a me interessa il colore del pelo della blastocisti donatrice che ho preso da un topolino, in questa impianto le cellule staminali modificate con il vettore, quindi che sono eterozigoti x il knock out..magari adesso dirò un'eresia tremenda, scusa ma proprio ho dei dubbi mostruosi, non sono le staminali che ho prelevato che mi danno l'altro fenotipo? io credevo che la topolina in cui vado ad impiantare la blastocisti servisse solo come mezzo x far avvenire la gravidanza! aiuto!!! |
Agne |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2012 : 21:47:44
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Cerchiamo di fare chiarezza, nel modo più schematico possibile, poi per i dettagli ci sono i libri di testo e il web.
TOPO KO tradizionale:
Vengono prese delle cellule ES da un topo, coltivate in coltura e "mutagenizzate", cioè viene modificato il gene di interesse in modo da renderlo KO.
Queste cellule ES vengono impiantate in una blastocisti (presa da una topina) e la bastocisti+cellule ES viene impiantata in un altro topo femmina che porterà avanti la gravidanza.
Il topo che nascerà sarà una "chimera" perché alcune cellule deriveranno dalle cellule della blastocisti e altre invece deriveranno dalle cellule ES che abbiamo impiantato.
Tra le cellule "germinali" che sono quelle che ci interessano, ci saranno anche qui cellule normali (derivate dalla blastocisti) e cellule KO (derivate dalle cellule ES), quindi incrociando questo topo chimera con un topo WT il "figlio" che verrà generato dalla cellula germinale KO sarà eterozigote per la mutazione.
Fin qui spero non ci siano problemi!
Ora veniamo al punto della domanda:
TOPO KO da blastocisti tetraploide:
Si prendo le cellule ES di un topo e si modificano in coltura... esattamente come prima.
Si prende un ovulo appena fecondato che ha raggiunto lo stadio di DUE cellule e si fanno fondere assieme le due cellule, in questo modo si ottiene una cellula tetraploide che andrà avanti a dividersi formando una blastocisti tetraploide.
Se finisse tutto così come diceva Ary ad un certo punto dello sviluppo si incontrerebbero dei problemi e non si avrebbe un embrione vitale, ma fino allo stadio di blastocisti non ci sono problemi.
Ora il turco sta proprio qui, le cellule tetraploidi della blastocisti sono in grado di formare la placenta ma non il feto!
Procedo come nell'altro caso inserendo le mie cellule ES modificate nella blastocisti, a questo punto lo sviluppo prosegue e il topo che verrà generato deriverà completamente dalle cellule ES. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2012 : 23:03:53
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Citazione:
Ora il turco sta proprio qui
Devi smetterla di usare l'iPad con l'autocorrect! 
No quella è farina del mio sacco stavolta! Stavo usando il PC perchè da iPad non posso inserire immagini.  |
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Agne_90
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2012 : 06:59:22
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| tutto chiarissimo!!! grazie mille...! ma c'è un problema, continuo a non capire gli incroci a livello fenotipico...il prof ha parlato del fatto che il topo chimera è striato...ma, chi è bianco? chi è nero? sembrerà una banalità, ma ogni libro che fa esempi dice una cosa diversa, perchè alla fine è una cosa arbitraria...e io mi sono confusa! |
Agne |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2012 : 17:59:40
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Citazione:
Messaggio inserito da Agne_90
tutto chiarissimo!!! grazie mille...! ma c'è un problema, continuo a non capire gli incroci a livello fenotipico...il prof ha parlato del fatto che il topo chimera è striato...ma, chi è bianco? chi è nero? sembrerà una banalità, ma ogni libro che fa esempi dice una cosa diversa, perchè alla fine è una cosa arbitraria...e io mi sono confusa!
In genere il "topo donatore di cellule ES" è nero e "il topo donatore della blastocisti" è bianco. Il topo chimera (figlio) sarà striato.
Ma in realtà non è che si fanno KO per cambiare il colore del pelo del topo, ma in genere sei interessata ad altri geni. Viene fatto l'esempio del colore del pelo perché è più intuitivo da capire. Può anche darsi che tu abbia trovato un esempio che dice il contrario, ma non è quella la cosa fondamentale. |
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blastocisti tetraploidi e knock out
