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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
 Inserito il - 08 febbraio 2012 : 17:16:30
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Salve a tutti! Premesso che ho letto la discussione presente sul forum su questo argomento, volevo chiedervi ulteriori chiarimenti sulla differenza tra queste due tecniche. Mi è chiara quella isopicnica: mi preparo un gradiente di concentrazione e le particelle si stratificano dove la loro densità è uguale alla densità della soluzione, in virtù del fatto che la loro vel di sedimentazione diventa uguale a zero, giusto? In quella zonale che cosa cambia? Le particelle non si sedimentano sempre in base alla loro densità??  e perchè una è in funzione del tempo e l'altra no?? Vi ringrazio anticipatamente :)
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
 Inserito il - 08 febbraio 2012 : 20:20:54
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Giusto per la isopicnica.
Per la zonale c'è una "sottile" differenza che cambia però di molto la sostanza della tecnica. Cioè, mentre nella isopicnica il gradiente di densità viene creato per avere punti più densi delle particelle che vogliamo separare (e perciò quando la particella X raggiunge il livello corrispondente alla sua stessa densità si ferma), nella zonale invece ogni punto del gradiente di densità è meno denso delle particelle che vogliamo separare. Queste quindi non troveranno mai un punto con densità uguale alla loro, perciò non si fermano durante la centrifugata e sono destinate a raggiungere il fondo e formare un pellet. Qui la "discriminante" della separazione sono principalmente le dimensioni delle particelle. |
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2012 : 10:28:11
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| Scusami forse mi sfugge qualcosa di ovvio oppure ho qualche lacuna "teorica" ma non capisco perchè se la soluzione ha densità maggiore delle particelle queste possono trovare la densità uguale alla loro.. se è maggiore non è uguale.. |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2012 : 12:01:35
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Forse mi sono espresso male. La soluzione ha un suo gradiente di densità, ok? Il punto è che questo gradiente, nella isopicnica, viene creato facendo in modo che vi sia un punto che abbia la stessa densità delle particelle da separare. Quindi una volta che la particella X raggiunge quel punto si arresterà; quel punto però non è detto che si trovi sul fondo del tubo da centrifuga, anzi, quasi mai e la sua posizione dipende da come viene creato il gradiente. Perciò oltre quel punto avrai ovviamente densità del mezzo via via maggiori; è per quello che dicevo "avere punti più densi delle particelle che vogliamo separare".
Più chiaro? |
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2012 : 13:26:09
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| Sì ti ringrazio, quindi abbiamo densità da quella uguale alla particella in su e dove è uguale la particella si ferma.. mentre in quella zonale la densità in qualsiasi punto è sempre minore di quella delle particelle che non trovando mai una uguale alla loro tendono a formare il pellet sul fondo se la centrifugazione non si ferma prima. Scusami se insisto, vorrei essere sicura di aver capito bene per non fare figuracce all'esame :) |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2012 : 20:15:40
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Proprio così, magari qualcuno può confermare..  |
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2012 : 18:33:00
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| Ti ringrazio :D |
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Tazia
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2013 : 11:20:49
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Riesumo questa vecchia conversazione per farvi una (forse stupida) domanda: ma quindi qual è la differenza tra una centrifugazione zonale e una normale centrifugazione differenziale?
o meglio, perché dovrei preferire una zonale ad una isopicnica o ad una differenziale? |
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Condrio-mito
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 20 giugno 2013 : 09:43:50
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| la centrifugazione isopicnica ti permette di separare organelli e molecole sub-cellulari con peso molecolare molto simile, mentre non puoi ottenere questo risultato con la centrifugazione differenziale. Con la centrifugazione isopicnica sono stati fatti molti passi in avanti nel frazionamento cellulare. Spero che quello che ho detto ti sia utile almeno un po' :) |
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Centrifugazione zonale e centrifugazione isopicnica
Didattica
