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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
 Inserito il - 01 marzo 2012 : 12:44:16
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ho cercato sul mio libro di biologia molecolare e non mi sembra nemmeno che sia nominato, sul libro di ingegneria genetica dice solo che alla base del walking cromosomico c'è la mappa dei cloni contigui(per la quale spero di non avere problemi)
sul russel è spiegato al capitolo 8 della mia edizione, ma non riesco a capire come si fa a effettuare un chromosome walking. potete aiutarmi? ho cercato nel forum ma non mi sono usciti particolari risultati, specie perchè a me interessa come si fa il procedimento in laboratorio.
lo scopo è che in Genetica umana molecolare, devo dire che questa tecnica, effettuata in questo modo, ci ha permesso di sapere che i geni beta-like sono posizionati in un determinato modo sul cromosoma, e che al 5'ci sono quelli fetali e embrionali e al 3' ci sono quelli dell'adulto.
aiutoooooooooo
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2012 : 12:53:06
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quello che ho capito io fondamentalmente è:
partendo dalla mappa di cloni contigui per esempio, io ho un lungo segmento di DNA cromosomico clonato.(quindi in una banca genomica)
prendo da questo DNA un pezzo, lo isolo(con enzimi di restrizione?)
e da qui parto clonando un pezzo terminale per usarlo come sonda.
vedo con quale regione clonata si sovrappone, ma io non riesco a capire se gia ho il dna cromosomico clonato, a che mi serve fare cio? sul disegno che sta sul russel mi fa capire che io sto cercando una cosa che gia so, e quindi mi sembra assurdo!! |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
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IsItSoWrong
Nuovo Arrivato
107 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2012 : 13:49:30
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Che io sapessi, parti innanzitutto da una regione che sai essere più o meno associata con il gene che ti interessa (analisi alberi con marcatori, calcolo del load score, etc.); in questo modo hai già una sonda da cui partire. A questo punto per arrivare al gene che ti interessa:
1. Screening genoteca di cloni contigui
2. Subclonaggio dell'inserto che ha ibridato (lo riprendi dalla genoteca stesso)
3. Costruzione sonda complementare a questo inserto.
4. Screening genoteca di cloni contigui.
E ripeti questi passaggi finché non arrivi al tuo gene. Ovviamente per ogni screening che farai avrai due cloni che si illuminerano alla volta (a meno che non hai ibridazioni aspecifiche), e questo perché un clone avrà ad un estremità la sonda e un altro clone avrà all'estremità opposta sempre la stessa sonda.
Per riconoscere la sequenza specifica, non saprei in realtà. Noi facemmo l'esempio della fibrosi cistica, in cui riconobbero tre possibili geni per presenza di isole CpG e per indentificare quale dei tre fosse, confrontarono le ibridazioni con sonde di ognuna di questi tre possibili geni con liberie a cDNA dei malati e altre di cDNA dei sani.
Questo è quello che so del chromosome walking, però meglio avere conferma visto che l'abbiamo fatta in triennale e immagino tu stia in specialistica! |
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2012 : 16:38:25
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cerco di mettere insieme le informazioni che ho, con le vostre, proverò a mettere tutti i pezzi del puzzle, e se c'è qualche altro problema tornerò a chiedere il vostro aiuto!!
grazie!!
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walking cromosomico
