| Autore |
Discussione |
|
|
markino3
Nuovo Arrivato
26 Messaggi |
 Inserito il - 12 marzo 2012 : 14:41:26
|
Ciao a tutti.
Dovrei fare una Real-Time quantitativa su dei campioni che presentano una popolazione mista di batteri. L'idea (confermata da articoli presenti in letteratura) č di estrarre il DNA totale dal campione biologico e utilizzare poi dei primer specifici per ricercare i batteri di interesse. La mia domanda č: una volta che ottengo il ciclo soglia dei diversi batteri che voglio studiare, come faccio a passare dal Ct al numero di cellule (CFU) nel campione?
Grazie mille!
Marco
|
|
|
|
|
Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2012 : 19:29:08
|
| utilizzi uno standardi di rferimento (es copie di gene a diluizioni seriali) cs' per i Ct dello standard consoci le copie di gene associate, e ovviamente 1 gene = 1 CFU. |
 |
|
|
markino3
Nuovo Arrivato
26 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2012 : 16:51:11
|
| Ma come faccio a sapere il numero di copie del gene standard? |
|
|
|
cami
Utente Junior
Cittā: roma
136 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2012 : 17:19:50
|
| Ciao! Io non ho mai usato la Real Time per l'applicazione che descrivi tu, perō credo che il principio sia sempre lo stesso... Normalmente quando vuoi fare una Real Time quantitativa ti devi preparare una retta di taratura amplificando quantitā note di DNA, quindi penso che se tu ti prepari una retta basata su Ct/CFU, quando analizzi il tuo campione, interpolando i Ct che ottieni sulla tua retta dovresti essere in grado di risalire alle CFU.. |
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2012 : 17:56:11
|
Posto che la mia idea è identica a quella di cami, googlando "Real Time CFU" ho trovato questo tra i primi tre risultati.
Quantification of Bacteria Adherent to Gastrointestinal Mucosa by Real-Time PCR
Dagli un'occasione, concettualmente mi pare la stessa cosa.
PS:
Oltretutto un batterio non dovrebbe avere una copia soltanto di un gene? (domanda non retorica, eh) |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
|
|
|
roberta.s
Utente Junior
Cittā: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2012 : 18:30:06
|
| Se non consideri i plasmidi si'(e comunque non so se per amplicficare il DNA plasmidico serva un protocollo apposito) |
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2012 : 18:41:24
|
Certo, tralasciando i plasmidi  |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
|
|
|
Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2012 : 19:25:59
|
| nel mio lab fanno realtime quant x batteri, a appunto usano uno sdr esogeno x fare la retta di taratura, ke č appunto un plasmide cn clonato un gene batterico a dluiz specifiche, in cui si consid 1 copia gene= 1cfu. |
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2012 : 19:44:56
|
Non avevo commentato la tua risposta per il semplice fatto che č cosi' sms-shaped che mi devo sforzare per interpretarla. Ed io sono piiiiigro  |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
|
|
|
markino3
Nuovo Arrivato
26 Messaggi |
Inserito il - 14 marzo 2012 : 17:00:21
|
Grazie a tutti!
Tendenzialmente non vorrei utilizzare un plasmide, perō ho visto che č molto "di moda" in letteratura. Vediamo cosa dice il capo.
Grazie ancora a tutti! |
|
|
| |
Discussione |
|
Real-Time quantitativa
Didattica
