| Autore |
Discussione |
|
|
Biovirus
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 28 marzo 2012 : 09:50:07
|
Ciao.
Qualcuno conosce un metodo/protocollo per concentrare RNA?
Grazie grazie
|
|
|
|
|
cami
Utente Junior
Città: roma
136 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2012 : 10:16:58
|
| Potresti provare con isopropanolo 100%, incubazione di 10 min a RT, centrifuga per 15 minuti a 14000 rpm a +4°C, io l'ho fatto una volta e mi è venuto bene, però il campione era acquoso e, sebbene diluitissimo, la quantità di RNA era elevata, quindi alla fine ho avuto una buona resa, però non ti assicuro niente... |
“Research is what I'm doing when I don't know what I'm doing”Werner von Braun |
 |
|
|
roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2012 : 11:37:23
|
| Vacuum speed concentrator |
|
|
|
Biovirus
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2012 : 11:40:02
|
Scasami..mi puoi spiegare meglio cosa sia Vacuum speed concentrator?
grazie |
|
|
|
roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2012 : 11:43:54
|
ecco qui
http://www.che.iitb.ac.in/online/labfacility/vacuum-centrifugal-concentrator
è una centrifuga a vuoto: metti i tubi con il campione che vuoi concentrare e dopo risospendi il pellet (una sorta di) in meno solvente.
L'ho usato per DNA e RNA, vedi se puo' fare al caso tuo. Per l'RNA credo sia consigliato, ma per il DNA una normale precipitazione va bene.
ciao! |
|
|
|
Biovirus
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2012 : 11:48:17
|
Grazie.
L'unico mio problema è che devo semplicemente fare una prova e non potrei quindi comprare addirittura uno strumento.
Qualcuno ha mai utilizzato le colonnine Amicon-ultra della Millipore? |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2012 : 22:51:21
|
Citazione:
Messaggio inserito da Biovirus
Qualcuno ha mai utilizzato le colonnine Amicon-ultra della Millipore?
Io le uso per le proteine, ma dovrebbero funzionare bene per DNA e RNA. |
|
|
|
Biovirus
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 03 aprile 2012 : 09:13:42
|
Per GFPina:
solo per conoscenza..che protocollo usi?Intendo giri, tempi e temperatura di centrifugata?
Grazie Ciao |
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 03 aprile 2012 : 10:05:00
|
Io uso gli amplicon della millipore per concentrare proteine e solitamente seguo questo protocollo:
a) 500 uL di acqua, 3000 rpm, 10 mn, 4°C
b) 500 uL di tampone in cui si trova la mia proteina, 3000 rpm, 10 mn, 4°C
c) 2 mL del mio campione, 3000 rpm, 15 mn, 4°C,
d) controllo la presenza di eventuali aggregati precipitati, spipetto dolcemente prelevando dal fondo del filtro e rilasciando all'apice per risospendere la proteina,
e) controllo la OD e in base ad essa decido se e per quanto ripetere la procedura (dal punto c ovviamente)
NOTE:
- ovviamente si tratta di proteine, non di acidi nucleici;
- a te interessa la velocità di centrifugazione in g, dopo controllo e te la comunico;
- il tempo di centrifugazione dipende anche dal cut-off del filtro: mi pare di aver centrifugato 2 volte per 15 minuti per passare da un volume di 2 mL a 500 uL con un cut-off di 10 kDa per proteine globulari;
- altro non mi viene in mente |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 03 aprile 2012 : 19:41:39
|
Citazione:
Messaggio inserito da Biovirus
Per GFPina:
solo per conoscenza..che protocollo usi?Intendo giri, tempi e temperatura di centrifugata?
Grazie Ciao
Il mio è in realtà un protocollo modificato perché o ha che fare con campioni rognosi, quindi ad es. non posso centrifugare a freddo perché ho urea nel campione che a freddo precipita... e vari altri problemi.
Comunque dipende anche da quale dispositivo utilizzi, ci sono di vari volumi e di vari cut-off e il protocollo viene specificato per ciascuno di essi.
Comunque per la concentrazione di RNA più che gli "amicon" sono meglio i "microcoon", in ogni caso qua trovi le informazioni sull'ultrafiltrazione con dispositivi millipore:Ultrafiltration (Millipore)
a pag. 63 c'è quello che interessa a te.
Ci sono poi anche altre ditte che fanno devicies per ultrafiltrazione, ad es. io (sempre per le proteine però) ho utilizzato anche i Vivaspin. |
|
|
| |
Discussione |
|
Concentrazione RNA
Didattica e Relazioni
