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adham
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10 Messaggi

Inserito il - 02 aprile 2012 : 23:33:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adham Invia a adham un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La mia domanda è la seguente:
Perchè il gene-targeting è applicabile solamente ai mammiferi?
o per meglio dire: è applicabile necessariamente solo ai mammiferi?
Noto che negli altri animali modello è possibile fare solo dei knock-in o knock-down attraverso random insertion (nell'ambito della manipolazione genetica diretta senza ricorrere a selezioni tramite incroci)
come mai, dipende solo dal fatto che le ES di topo si possono mettere in coltura e selezionare quelle con la ricombinazione? Dipende dal macchinario di ricombinazione omologa?? Rispondete numerosi :D
Grazie

roberta.s
Utente Junior

yeast

Città: Parigi


564 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2012 : 00:29:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di roberta.s Invia a roberta.s un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
scusa, dove hai trovato tali (errate) informazioni?
prova a cercare "gene targeting" (si scrive senza h) su pubmed e troverai le info corrette.
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adham
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2012 : 19:34:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adham Invia a adham un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Rispondo subito che non ne ho certezza, ma credo che le mie informazioni non siano così errate. linkami dei lavori dove dimostrano chiaramente metodiche di gene targetin su animali non mammiferi.

chiaramente non valgono i sistemi cre o flp perchè la loro ricombinazione agisce su un costrutto precedentemente integratosi in modalità random.

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roberta.s
Utente Junior

yeast

Città: Parigi


564 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2012 : 00:34:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di roberta.s Invia a roberta.s un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho letto qualche mese fa una review molto ampia e ben fatta. L'autore è Porteus, prova a cercare su pubmed, non ce l'ho sotto mano.
Comunque: chicken, mice, human cell line, yeast, plant.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2012 : 09:07:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
High-efficiency gene targeting in Drosophila with zinc finger nucleases.
Genome editing in plant cells by zinc finger nucleases.
Reverse genetics in eukaryotes

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roberta.s
Utente Junior

yeast

Città: Parigi


564 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2012 : 09:16:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di roberta.s Invia a roberta.s un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Eccomi in lab. Allora:
Targeted genome editing across species using ZFNs and TALENs. Wood A J et al.
Targeted genome editing in pluripotent stem cells using zinc-finger nucleases. Wozowicz S B et al.
zinc finger nucleases: custom-designed molecular scissors for genome engineering of plant and mammalian cells. Durai et al.

Ma, davvero, ci sono migliaia di lavori del genere su Pubmed.
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adham
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 11 aprile 2012 : 15:29:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adham Invia a adham un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie a tutti della risposta
Da quello che vedo però questo gene targeting è diverso da quello classico, usa una variante della zinc-finger.

CMQ evitando di fare un altro post, la mia domanda è la seguente:
Ma se io volessi favorire l'integrazione di una cassetta genica nel genoma di uno zigote, dovrei microiniettare il linearizzato o la forma del plasmide circolare va bene uguale?

Ad ESEMPIO SE USO sequenze trasponibili, la cui trasposizione è mediata dall'enzima trasposasi, non importa se il costrutto sia linearizzato o in forma circolare, giusto?

Infine, un costrutto linearizzato non dovrebbe essere degradato istantaneamente?
grazie a tutti per le possibili risposte
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 11 aprile 2012 : 17:00:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Da quello che vedo però questo gene targeting è diverso da quello classico, usa una variante della zinc-finger.


Sono nucleasi a zinc-finger, vedi: http://en.wikipedia.org/wiki/Zinc_finger_nuclease


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