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vihy_90
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 26 aprile 2012 : 20:38:22

Salve a tutti,
la mia domanda riguarda la mutagenesi e pi� nello specifico gli approcci utilizzati per effettuare una delezione puntiforme o un'inserzione di una seq. nucleotidica.
Quello che farei io sarebbe creare un oligonucleotide sintetico, complementare alla regione di DNA di interesse e che nel caso delle delezioni sia vuoto in corrispondenza delle basi che voglio eliminare,
viceversa per le inserzioni che abbia invece la seq in piu che voglio inserire.
VI chiedo quindi:
-se � corretto quello che ho scritto (se magari c'� un modo migliore/pi� tecnico e preciso di esprimerlo) o se ci sono altri metodi alternativi per fare inserzioni/delezioni ;
-e soprattutto COME FACCIO SE volessi fare una delezione/inserzione di una regione pi� ampia es di 1 Mpb
GRAZIEEEEEEEEEE IN ANTICIPO!!!

vihy_90
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 02 maggio 2012 : 10:03:07

allora nessuno sa dirmi niente al riguardo?? :(

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 02 maggio 2012 : 11:05:35

Quello che hai scritto � corretto, e funziona per mutazioni di geni che si trovano su plasmidi.
Per mutazioni pi� ampie devi fare dei veri e propri clonaggi con pcr, tipo:


gene:
                   zona da eliminare
                   -----------------
---------------------------------------------------------
->               <-                 ->                 <-

------------------                  ---------------------

il primer 2 e 3 devono avere lo stesso sito di clonaggio.

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
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