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Lck3
Nuovo Arrivato
30 Messaggi |
 Inserito il - 30 aprile 2012 : 10:39:42
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Cia a tutti,
ho un dubbio.
Devo aggiungere una certa quantita' di farmaco a differenti flask ma non rieco a capire quale sia la quantita' esatta che devo prendere dalla soluzione iniziale.
Ho il mio farmaco ad una concentrazione iniziale di 5mM disciolto in un mL.
Voglio che per ogni mia flask ( dove ci sono 23 mL di media totale) ci sia una concentrazione finale di farmaco pari a 5nanoM.
Scusate ma quanto farmaco devo prendere dalla mia soluzione iniziale di 1 mL?
Scusate lo so' che la domanda e' banale ma non mi ritrovo con i conti che ha fatto il mio capo... 
grazie!!!
ps: il peso molecolare di questo farmaco e' 354.45
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 30 aprile 2012 : 11:46:21
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5mM = 5000000 nM
Secondo la formula
C1 x V1 = C2 x V2 -> 5000000 nM x X mL = 5 nM x 23 mL -> X mL = 5 nM x 23 mL / 5000000 nM = 0,000023 mL = 0,023 uL
Quindi prendi 0,023 uL dallo stock 5 mM e li metti in 23 mL di cellule per ottenere una concentrazione finale pari a 5 nM nei 23 mL stessi.
Suggerimento: essendo 0,023 uL difficili da pipettare, puoi fare delle diluizioni seriali in modo da ridurre l'errore. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 30 aprile 2012 : 11:49:33
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Il fatto che sia disciolto in 1ml o in 100ml non ha alcuna importanza, la concentrazione è sempre 5mM.
Se prendi 0.5 ml del tuo stock la concentrazione sarà sempre 5mM, così come se ne prendi 250 ul.
Quindi il problema è molto semplice:
Hai 5mM e vuoi arrivare a 5nM, vuol dire che devi diluire 1 milione di volte (diluizione 1:1000000)
Quindi 1ul per 1000000 ul (=1l)
Siccome è poco pratico fare una diluizione del genere ti conviene fare una diluizione intermedia 1:1000 e poi diluire 1:1000 questa altra diluizione.
Se il volume della flask è 23ml vuol dire che dovrai aggiungerci 1/1000=23ul della tua soluzione intermedia.
Quindi farai un volume di diluizione intermedia sufficiente per tutte le flasks. Ad es. se ne hai 20 ti serviranno 460ul, (ne farai 1ml per comodità).
Quindi riassumendo:
Stock 5mM -> diluizione 1:1000 per avere 5uM -> metti 0.1ul in 100ul o 1ul in 1ml etc. a seconda del volume che ti serve -> la diluizione intermedia andrà infine diluita 1:1000 nelle flask, mettendone 23ul/flask
Vivamente consigliato: http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/ |
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Lck3
Nuovo Arrivato
30 Messaggi |
Inserito il - 30 aprile 2012 : 13:24:54
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emmm scusate....
0,023 uL o 2.3ul??? 
perche' il mio capo mi ha fatto mettere 23 ul.... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 30 aprile 2012 : 13:32:55
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Scusa, 23ul, ho sbagliato a scrivere io :)
Correggo il messaggio di sopra
0.023ul li aggiungi se non fai la diluizione intermedia |
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Lck3
Nuovo Arrivato
30 Messaggi |
 Inserito il - 30 aprile 2012 : 13:35:34
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grazie!!!!!!!!!!  |
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concentrazione farmaci
