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virgins
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 Inserito il - 02 maggio 2012 : 19:02:16
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La retta di taratura.
A partire dagli esempi concreti che avete trattato durante il tirocinio cercate di spiegare da un punto di vista più generale che cosa è e a che cosa serve la retta di taratura anche spaziando oltre gli argomenti trattati. Internet potrà supportarvi in maniera adeguata.
A questo punto simulate, con unimpostazione di fantasia, la quantificazione allo spettrofotometro di due campioni di una proteina, che avete appena estratto da una linea cellulare, utilizzando il metodo della retta di taratura (potete scegliere uno dei metodi di dosaggio delle proteine descritti nella dispensa consegnatavi durante il tirocinio).
Supponiamo che le concentrazioni in µg/ml da voi misurate siano inferiori a quella necessaria per il vostro esame diagnostico (a puro titolo di esempio: avete rispettivamente 10 e 20 di µg/ml di proteina per 3 ml totali di campione mentre ve ne servono 30 µg/ml). E cioè avete risospeso la poteina in un volume di tampone tale da avere una diluizione eccessiva.
Come procedereste?
Descrivete tutto quanto in dettaglio, non solo relativamente al procedimento logico ma anche relativamente allutilizzo di tutti gli strumenti (pipette, spettrofotometro, centrifuga ecc.).
Dove necessario inserite dati di fantasia (concentrazioni, impostazioni centrifuga ecc.) oppure controllate su internet.
Anche le dispense consegnate in occasione del tirocinio potrebbero esservi daiuto.
ciao ragazzi, questo è il mio testo di un compito, sono in alto mare, non tanto nella prima parte ma nella seconda..come posso fare quando si parla di 10 e 20 microgrammi??
come fareste voi?
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0barra1
Utente Senior
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virgins
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Inserito il - 02 maggio 2012 : 19:39:01
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mmm..che dovessi ricentrifugare mi era chiaro ma poi il volume lo invento io??
praticamente è un compito inventato!! oh mamma mia!! |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
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Inserito il - 02 maggio 2012 : 20:03:29
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Beh, il volume non lo inventi tu.
Hai un volume iniziale di 3 mL, è evidente che dovrai centrifugare fino a ridurre tale volume ad un valore per cui la concentrazione finale è quella necessaria per il saggio. Lo puoi calcolare.
Ovviamente se intendi concentrare per centrifugazione devi usare dei filtri i cui pori abbiano un diametro tale per cui la tua proteina non vi passa attraverso: si parla di cut-off per indicare le dimensioni minime (in kDa) che l'analita deve avere affinché non oltrepassi il filtro. Per usare il filtro appropriato devi ovviamente avere qualche conoscenza sulla proteina percio'.
Oltre a centrifugare potresti far parecchio altro, per esempio precipitare (salting-in, salting-out).
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virgins
Nuovo Arrivato
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Inserito il - 02 maggio 2012 : 21:12:02
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| grazie! |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
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Inserito il - 02 maggio 2012 : 21:13:00
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| Non dimenticarti di fare le dovute misure spettrofotometriche per accertarti di aver davvero raggiunto la concentrazione desiderata... |
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virgins
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Inserito il - 03 maggio 2012 : 16:01:10
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guarda, per me è proprio arabo, io l'esercizio lo devo risolvere a sommi capi, in poche parole comunque la concentrazione che desidero, la calcolo in quale modo? |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
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Inserito il - 03 maggio 2012 : 16:07:44
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Un esempio pratico:
il tuo campione è concentrato 10 ug/mL, in un volume di 2 mL.
La concentrazione che vuoi raggiungere è 20 ug/mL.
Essendo la concentrazione finale doppia rispetto a quella iniziale, sarebbe una buona supposizione ritenere che vada centrifugato il campione sino a che il volume non si è dimezzato (=1 mL).
Una volta che hai raggiunto quel volume, tuttavia, non puoi dare per scontato che la concentrazione abbia raggiunto il valore sperato: la concentrazione va comunque misurata.
E lo puoi fare con uno spettrofotometro. |
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Concentrazione campione
Didattica
