Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
tokiore
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Pomigliano D'Arco
3 Messaggi |
 Inserito il - 17 maggio 2012 : 00:14:03
|
Salve a turri, spero di inserirmi nella sezione giusta...
sto svolgendo esperimenti per la tesi sperimentale.
Nelle mie cellule overesprimo alcuni fattori di trascrizione e così per RT-PCR verifico un aumento di mRNA dei loro geni bersaglio. Poi faccio un western blot (normalizzato con actina) e non rilevo variazioni rispetto ai controlli che invece avevano livelli di mRNA circa 10 volte più bassi.
Che spiegazione vi dareste?
Io oltre i miRNA e qualche regolazione sui fattori di inizio traduzione (eIF4 mi pare) non ricordo alcun tipo di regolazione sulla traduzione...
Potrebbe esserci un sistema di saturazione dei ribosomi?? (i fattori di trascizione che overesprimo con vettori lentivirali aumentano per mRNA di più di 1000 volte potrebbero saturarmi il macchinario di traduzione??)
Aiutatemi....
XD
|
|
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
 Inserito il - 17 maggio 2012 : 10:04:45
|
dall'mRNA alla proteina il viaggio è lungo! hai pensato a modificazioni post-traduzionali? magari le tue proteine bersaglio si overesprimono, ma possono essere non modificate, ritenute nel Golgi, degradate perchè in eccesso, etc etc...
Io come primo esperimento proverei a inibire il proteasoma, vedi un po' se la quantità aumenta. |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
 |
|
|
tokiore
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Pomigliano D'Arco
3 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2012 : 01:53:05
|
Ti ringrazio per la risposta.
Detto questo, puoi dirmi un inibitore di proteasoma comune, che magari vedo se è in laboratorio.
Ho ripetuto l'esperimento e a breve saprò se ci sono cambiamenti. Quello che stavamo pensando in lab è che anche i controlli esperimono livelli della proteina alti e che questa, nei campioni trattati, non possa aumentare più di tanto...
...chi sà
a presto |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
Regolazione sintesi proteica
Didattica
