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Autore Discussione  

ilenia marseille
Nuovo Arrivato

Prov.: Estero
Città: marsiglia


2 Messaggi
Inserito il - 29 maggio 2012 : 17:30:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilenia marseille Invia a ilenia marseille un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti devo fare una RT-PCR SU YFV USANDO COME STRUMENTO: LightCycler® 2.0 Instrument

E COME KIT: SYBR® Green Real-Time PCR Master Mixes
DEVO IN AGGIUNTA USARE LA PROBE? COME CON UN TAQ-MAN?
GRAZIE MILLE

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Città: Paris, VIIème arrondissement


3847 Messaggi
Inserito il - 29 maggio 2012 : 18:35:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao,
volevo solo farti notare che RT-PCR non significa Real Time PCR.
RT-PCR sta infatti per Reverse Transcriptase PCR e amplifica DNA precedentemente retrotrascritti da RNA, solitamente messaggeri.
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 29 maggio 2012 : 18:35:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No se fai una real-time con il SYBR Green non utilizzi le sonde!

Comunque ti consiglio di andarti a vedere un po' di materiale sulla real-time (i diversi tipi), trovi molto materiale anche cercando nelle discussioni di questo forum.
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NickyCaos
Nuovo Arrivato



1 Messaggi
Inserito il - 01 giugno 2012 : 12:43:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di NickyCaos Invia a NickyCaos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti volevo avere un'informazione e non sò se la discussione sia quella giusta, ma la faccio lo stesso.
Io devo amplificare un frammento di 3Kb e ho provato ad utilizzare 2 tipi di Taq --> PFU e la EuroTaq (seguendo i loro protocolli per le concetrazioni di ogni reagente), ma in entrambi i casi non sono riuscita a vedere niente, ne con 3 ore di PCR e neppure facendo una RETRO specifica ... cosa mi consigliate?

Se la PCR dovesse venire poi dovrei passare al clonaggio, quindi l'efficienza ma sopratutto l'affidabilità della TAQ deve essere alta
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