Ciao a tutti!! vorrei avere informazioni o se conoscete qualche sito dove posso trovare qualche spiegazione su alcune tecniche di biologia molecolare: - TGCE: temperature gradient capillary electrophoresis - SSCP: single strand conformation polymorphisms - DGGE: denaturing gradient gel electrophoresis - HA: heteroduplex analysis - DHPLC: denaturing high performance liquid chromatography Vi ringrazio tanto Ele
x la DGGE: metodologie che si basa sull'utilizzo di un gel di poliacrilammide a gradiente, in condizioni denaturanti, che consente di separare le bande; la DGGE fa uso di una denaturazione chimica. Con questa tecnica si può analizzare rDNA 16S amplificati tramite PCR (vengono utilizzati opportuni primer, talvolta ricchi in GC); il gradiente del gel consente la separazione di bande. In questo modo una singola banda nel gel corrisponde ad un ceppo batterico nel caso in cui si voglia analizzare una comunità microbica ignota; se vi è sovrapposizione di bande è possibile che la risoluzione del gel non sia ottimale e si può procedere ad una risoluzione più alta per evitare le sovrapposizioni. Il vantaggio di questa metodologia sta nel fatto che si ha un’analisi quantitativa dei ceppi microbici presenti e, recuperando il DNA da ogni banda e confrontandolo con database opportuni, si può fare anche un’analisi qualitativa. Puoi trovare un'esempio in questo articolo Muyzer, G. (1999) DGGE/TGGE, a method for identifying genes from natural ecosystems. Curr. Opin. Microbiol. 2, 317–322