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Alberto90
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
 Inserito il - 14 giugno 2012 : 15:24:49
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Ho una domanda di un test sul cut off: non capisco se devo scegliere un koff vicino al valore della proteina da dializzare oppure molto piccolo per evitare la sua fuoriuscita... Quale risposta scegliereste?
Tramite dialisi devi rimuovere l’eccesso di sali da una soluzione proteica contenente citocromo c (MW. 12000 Daltons). Quale strategia utilizzi?
a)Dialisi su Acetato di cellulosa con cutoff di 30 kDa
b)Gel filtrazione su resina con limite di esclusione di 2000 Dalton
c)PMSF con cutoff di 10 kDa
d)Nitrocellulosa con cutoff di 1 kDa
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bio15
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2012 : 20:13:49
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| Io starei tra i primi due..ma cosa intendi per PMSF? |
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Alberto90
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2012 : 12:06:30
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Non ho idea di cosa intenda con PMSF.
Comq io ho escluso l'opzione 1 in quanto se il cut off è di 30 Kda significa che molecole più piccole hanno più del 50% di probabilità di passare i pori quindi è inutile in quanto non mi trattiene la proteina di 12 Kda! O sbaglio?
Opterei per la seconda, in quanto la filtrazione su gel di quel tipo mi tratterebbe tutte le molecole più piccole di 2Kda e penso che vengano trattenuti in tal modo tutti i sali e solamente la proteina sia eluita...
Fila come discorso? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2012 : 20:14:10
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Beh io di getto ti risponderei la seconda, ma non per il cut-off ma perché per fare un desalting userei una gel-filtrazione piuttosto che una dialisi, proprio per la differenza che c'è tra i due metodi.
Comunque parlando di cut-off:
1) no di certo perche a 30KDa passa anche la tua proteina!
2) ok sia per il metodo che per il cut-off
3) PMSF secondo me è sbagliato perchè è un inibitore delle proteasi, non una membrana magari era PES (o altro, ci sono vari tipi di membrane e sigle simili che iniziano per P). Comunque il cut-off di 10KDa è troppo vicino a quello della tua proteina
4) anche questa in teoria potrebbe andare... |
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Alberto90
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 16 giugno 2012 : 08:43:00
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Citazione:
Messaggio inserito da GFPina
Beh io di getto ti risponderei la seconda, ma non per il cut-off ma perché per fare un desalting userei una gel-filtrazione piuttosto che una dialisi, proprio per la differenza che c'è tra i due metodi.
Comunque parlando di cut-off:
1) no di certo perche a 30KDa passa anche la tua proteina!
2) ok sia per il metodo che per il cut-off
3) PMSF secondo me è sbagliato perchè è un inibitore delle proteasi, non una membrana magari era PES (o altro, ci sono vari tipi di membrane e sigle simili che iniziano per P). Comunque il cut-off di 10KDa è troppo vicino a quello della tua proteina
4) anche questa in teoria potrebbe andare...
Credo fosse una risposta trabocchetto la 3. Direi che siamo d'accordo. La 4 a questo punto non è troppo piccolo come cutoff xò? Cioè praticamente elimina solo contaminanti molto molto piccoli...
Ti ringrazio comunque per la risposta  |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 16 giugno 2012 : 10:57:23
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Beh per eliminare i sali in realtà anche 1KDa dovrebbe andare bene, sono molecole abbastanza piccole. In genere quando si fanno queste cose è bene sapere esattamente cosa hai i soluzione e cosa vuoi eliminare (che PM ha).
Ma immagino che questa sia una domanda di un esame.
La cosa che mi lascia un po' perplessa in realtà è che anche se io preferirei una gel-filtrazione per desalare, di fatto una gel-filtrazione non è una dialisi e la domanda ti dice "tramite dialisi". Sinceramente non saprei quindi darti una risposta esatta. |
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DIALISI scelta cut off
Didattica e Relazioni
