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joleee80
Nuovo Arrivato


Prov.: Napoli
Città: napoli


24 Messaggi
Inserito il - 10 gennaio 2007 : 18:32:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di joleee80 Invia a joleee80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti......qualcuno mi può aiutare????
Devo preparare una soluzione di BSA (bovine serum albumin)1mg/ml....per fare una retta di taratura per la determinazione della concentrazione dei miei campioni:
Si scioglie in acqua?
E dopo aver fatto la soluzione bisogna leggerla allo spettrofotometro per aggiustare la concentrazione usando la legge di Lambert-Beer??
Qualcono sa quale è il coefficiente di estinzione molare per la BSA??

Oppure se qualcuno mi può indicare il proprio protocollo....
Davvero Grazie
Ciò che mi nutre .......mi distrugge....

RM
Nuovo Arrivato



115 Messaggi
Inserito il - 10 gennaio 2007 : 21:21:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RM Invia a RM un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io usavo questo protocollo
- sciogliere 5 mg BSA in 10 mL dH2O
- leggere allo spec in couvette di quarzo a 280 e 260 nM
- Calcolare la [BSA] con questa formula:

[BSA](mg/mL) = (A280 X 1.55) - (A260 X 0.76)

Partendo da una soluzione di BSA 0.5 mg/mL la conc dovrebbe essere circa 0.324 mg/mL. Comunque per averla 1 mg/mL si possono scalare le quantità.
Ciao
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 10 gennaio 2007 : 21:54:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
L'unica piccola precauzione quando sciogli la BSA è di non agitare troppo perchè fa molta schiuma! :D
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joleee80
Nuovo Arrivato


Prov.: Napoli
Città: napoli


24 Messaggi
Inserito il - 10 gennaio 2007 : 22:05:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di joleee80 Invia a joleee80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ti ringrazioooo...
Ciò che mi nutre .......mi distrugge....
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joleee80
Nuovo Arrivato


Prov.: Napoli
Città: napoli


24 Messaggi
Inserito il - 10 gennaio 2007 : 22:07:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di joleee80 Invia a joleee80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie RM.....
Ma se parto da 1mg/ml la formula non cambia vero??
Ciò che mi nutre .......mi distrugge....
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RM
Nuovo Arrivato



115 Messaggi
Inserito il - 10 gennaio 2007 : 22:48:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RM Invia a RM un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
no...ma teoricamente per avere una conc finale di 1mg/mL dovresti partire da circa 1,5 mg/mL. Ovviamente non è importante il valore assoluto della concentrazione quanto avere una concentrazione nota. Puoi partire sciogliendo quantità + alte e poi una volta letta la conc., diluire a 1 mg/mL.
Ciao
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