Ciao a tutti, sono alle prese con l'esame di tecnologie del Dna ricombinante, mi rifaccio a questo sito perchè sto avendo alcune difficoltà con gli esercizi. Cerco qualcuno che possa darmi una mano per prepararmi in vista dell'esame. Sono disposta a prender ripetizioni. Qualcuno può aiutarmi? Spero proprio di si, perchè al momento navigo in acque parecchio profonde.. grazie. Annalisa
Ok.. facciamo un tentativo.. Grazie mille, davvero, per la tua disponibilità. Non sono molto abile con la PCR ed il clonaggio. Non saprei infatti svolgere esercizi simili: 1) Descrivi una procedura di PCR per mutagenizzare la sequenza sotto riportata nel punto indicato.
2) E' stato eseguito il clonaggio del DNA esogeno ottenuto per PCR con i primer plus e minus (sottoriportati) nel sito di restrizione Sma I (CCC/GGG) e del vettore plasmidico Puc19 (268 bp). Proporre una digestione con uno o più enzimi di restrizione per identificare mediante successiva analisi elettroforetica l'orientamento dell'inserto nei cloni ricombinanti. Calcolare inoltre la lunghezza dei frammenti di restrizione che si otterrebbero con i 2 tipi di ricombinanti. sequenza dell'amplicone: MINUS 14) Sma I 5’ATGAAACCATCCCGGGTTTCGCTGCTGGTCACGGTCT____________________________________________________________________________________________________________________________________ BamHI _______________________CTATAAAGGC172)GGATCC_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________335)CTGCAG_______________________________________________________-3’ Pst I PLUS + PLUS 5’- ATGAAACCATCCCGGGTTTC-3’ -MINUS 5’-CTAAAAAGCGCTGCAGTATTTC-3’ Gli esercizi mi sono stati dati così. E non sto capendo molto. Grazie ancora per la tua disponibilità.