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Autore

Discussione

littlw
Nuovo Arrivato

Citt�: Roma/Firenze

2 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2012 : 13:48:02

cIAO A TUTTI!!!
� da anni che spulcio molecularlab ma � la prima volta che vi chiedo aiuto e volevo dirvi che � bello aiutarsi cos�!!! :D

il mio problema � il seguente:

devo prepararmi una sonda per la fish e mi � stato dato un clone PAC di 115KB contenete il mio gene di interesse. Ora, sapendo che i PAC sono di circa 18 Kb ed la mia sequenza del gene � di circa 27.000 basi...tutto il resto cosa �???? hanno inserito tutta la regione intorno al mio gene?
e per poterci fare poi la nick translation, e quindi ottenere la sonda per la fish, come faccio?
avevo pensato a fare un pcr disegnandomi dei primer specifici per una regione di circa 500 bp( � la lunghezza adatta per una sonda fish)e poi continuare con la nuick translation.

Secondo voi potrebbe andare??
Conoscete altri modi??
GRAZIEMILLE A TUTTI E BUONE PROSSIME VACANZE!

zerhos
Utente Junior

Prov.: Pisa
Citt�: Pisa

421 Messaggi

Inserito il - 30 luglio 2012 : 17:45:43

Direi che fare prima una PCR per isolarti la sequenza che ti serve � decisamente la cosa migliore.
Come consiglio ti direi di non limitarti ad una sola sonda, ma di farne 2-3 in posizioni differenti sempre del tuo gene, cos� da avere un controllo sul segnale di appaiamento che andrai a vedere.

"l'unica differenza tra me e un pazzo � che io non sono pazzo!"
Salvador.Dal�