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Meri Ellis
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 Inserito il - 18 settembre 2012 : 12:27:32
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Salve a tutti, sono di fronte a dei test di Laboratorio Molecolare, a molti ho risposto io stessa (e vi espongo i miei ragionamenti). Non avendo le risposte per confrontarmi se sono giusti, pensavo-speravo che magari alcuni di voi possano correggermi:
1) Se effettuo una ligazione con 2 microlitri di vettore digerito concentrato 20 ng/microlitri e con cellule competenti 10^6, sono state ottenute, avendo utilizzato per la trasformazione e la piastratura tutta la miscela, 100 colonie, qual è l'efficienza di ligazione?
il mio ragionamento è il seguente:
2microlitri x competenza (10^6) = numero di colonie ricombinanti =colonie attese = 2*10^6
trasformo microlitri(10^6) in nanolitri(10^3)= 2000 nanolitri
(100 colonie osservate/ 2000 colonie attese)*100= 5
le opzioni = 20% ; 10% ; 40% ; 205% ; 5% .
2)se voglio inserire un codone di Stop TGA al 3' di un prodotto PCR sequenza si deve usare (le seq sono in direzione 5'-3')
GGGAGTTTT
GGGTCATTT
GGGATGTTT
GGGTGATTT
GGGACTTTT
io ho pensato l'ULTIMA GGGACTTTT (cioè semplicemente scegliendo le basi opposte di TGA)
Può andare? o c'è un ragionamento più complicato?
4)Quale dei seguenti valori di competenza chimica si può considerare non prevedibile?
1x10^12
1x10^9
1x10^4
1x10^5
1x10^7
non so se scegliere 10^4 o 10^12 sono indecisa. Help.
5)Un vettore contenente i geni o le sequenze araC, ori, bla è un vettore di? Esperssione giusto?
(espressione, clonaggio, subclonaggio, mutagenesi, trasformazione)
scusate se mi sono dilungata
magari non potete rispondere a tutte...ma magri dove ho fatto i miei ragionamenti se son sbagliati, riuscite a spiegarmi i perchè?
Grazie mille
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Laboratorio Biomolecolare
Didattica
