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Limpet
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Prov.: Roma
Città: Roma

83 Messaggi

Inserito il - 18 settembre 2012 : 16:48:55

Salve a tutti,

ho un problema che vedo segnalato più volte in questo forum, ma non trovo una spiegazione che mi sia d'aiuto. Sto amplificando un frammento di 1200bp, ma venendo anche altre bande a diverse altezze, ho lavorato per ottenere una maggiore specificità e una migliore PCR, modificando le concentrazioni di MgCL2, la T di annealing e le diluizioni di DNA. A un certo punto ho ottenuto le condizioni per cui ho la singola banda che mi interessa ma troppo fioca per una sequenza, così ho giocato sull'utilizzo di ampliconi per rimandare PCR e diverse concentrazioni di DNA e da allora....i miei gel vengono solo smirati, senza la banda di interesse e non mi viene più neanche la PCR originale. Ho pensato a una contaminazione, ma ho cambiato tutte le soluzioni tranne puntali e cose per il gel. Qualcuno ha un'opinione chiara?

grazie,