Amplificare mix di piccoli frammenti di DNA

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cece23
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14 Messaggi

Inserito il - 05 ottobre 2012 : 12:32:24

Ciao a tutti

vi espongo quello che � il mio problema e quello che ho pensato per risolverlo.

Ho disegnato e amplificato una sonda marcata con biotina. A questa sonda � stata successivamente eseguita la nick translation. La nick mi serve per ottenere dei frammenti pi� corti di dimensione fra 100 e 300 bp. A seguito della purificazione post nick perdo per� pi� del 50% della concentrazione iniziale della sonda. Siccome il costo della nick translation � molto elevato non posso aumentare la concentrazione iniziale della sonda.

L'unica soluzione che mi � venuta in mente � quella di amplificare il mix di frammenti corti (sono a duplice filamento) usando dei random hexamers. Secondo voi � possibile? Che enzima dovrei usare? Che condizioni termiche?

Grazie