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FaFFi
Nuovo Arrivato
Prov.: MB
Città: Villasanta
9 Messaggi |
 Inserito il - 07 ottobre 2012 : 14:59:26
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Ciao a tutti,
spero che qualcuno di voi sappia come aiutarmi io non so più dove sbattere la testa!
Ho iniziato a fare immunocitochimica su queste cellule staminali ottenute da tessuto adiposo più di un'anno fa..ma ho dei risultati strani.Il mio goal sarebbe un buon differenziamento neurale, ma purtroppo ho provato moltissimi protocolli senza successo. La cosa stupefacente è che se faccio delle immuno con markers neurali sulle cellule controllo trovo positività..ma cose inconcepibili tipo:
100% vimentina positive
100% nestina positive
100% beta tubulinaIII (TUJ1)positive
100% oligodendrocyte 4 (O4) positive
80-100% GFAP positive
Dunque in letteratura qualcuno ha evidenziato che queste cellule sono positive a markers neurali precoci e ok ma le mie sono positive anche ad O4 e GFAP, nonchè Tuj1 (cioè sono oligodendrociti, glia e neuroni tutto in uno?
Un ulteriore informazione è che le manrengo in coltura in 2 diversi terreni, uno è il classico alphaMEM che dovrebbe mantenerne la mesebnchimalità, uno invece è un pastrocchio di terreno, nel senso che la mia tutor insiste a chiamarlo terreno neuralizzante perchè è DMEM F12 con progesterono, transferrina...bFGF e EGF.
Quello che mi aspettavo era che con il secondo terreno potesse succedere una cosa del genere ma in realtà avviene anche quando le tengo in coltura in alphaMEM.
Pensavo fosse il protocollo utilizzato per l'immuno e ne ho cambiati tre senza che cambiasse qualcosa..anzi più passa il tempo più vado al confocale e più i miei vetrini sono completamente neri purtroppo qui si aggiunge l'odio del tecnico per il mio tutor)..insomma un casino.
Qualcuno è così gentile da dirmi che significato hanno questi risultati??
grazie infinite!!!!!
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Immunocitochimica su cellule mesenchimali staminali
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