Ciao a tutti, ho una copia di primer per la classificazione dei lattocochi, se ho un Lactococcus lactis ottengo un prodotto di amplificazione di 933pb, se ho un Lactococcus cremoris ottengo circa 1100pb......tutto questo sino a prima di Natale ora hanno deciso di amplificare solo la specie lactis (933pb)l'altra specie non mi da nessun prodotto. Ho cambiato i primer, ho riestratto il DNA a partire da ceppi di collezione internazionale, ho cambiato Ta.......non riesco a capire Se sapete aiutarmi vi ringrazio di cuore. A tutti buon lavoro
Hai per caso cambiato Taq? a volte succede quando si cambia "marca". Se ciò non fosse non saprei che dirti..... A volte l'aggiunta di DMSO oppure di BSA migliorano la resa di una PCR. Altrimenti prova a cambiare la taq
Così a naso mi verrebbe da pensare che con un tipo di lattococchi i primers amplificano una sequenza, mentre nell'altro caso un'altra sequenza. Bisognerebbe forse appunto sequenziarle e vedere come sono.