Compatibilità condizioni Enzimi restrizione

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Autore

Discussione

0barra1
Utente Senior

Città: Paris, VIIème arrondissement

3847 Messaggi

Inserito il - 27 ottobre 2012 : 18:03:28

Salve a tutti,
vorrei chiedervi se sapreste indirizzarmi verso un database online ove valutare la compatibilità di condizioni tra due diversi enzimi di restrione? Es., se le due endonucleasi che intendo utilizzare abbiano un optimum di attività alla stessa temperatura oppure sia richiesto operare le due reazioni di restrizione in serie, anziché in parallelo?
Domanda bonus: oltre a Temperatura, quali altri parametri dovrei prendere in esame? Al momento riesco solo a pensare a concentrazione di sali.

Grazie delle dritte e buon sabato sera.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

SpemannOrganizer
Utente

Città: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 27 ottobre 2012 : 20:22:47

io ti suggerirei di andare a vedere sul website del tuo fornitore di enzimi di restrizione. Ad es., noi abbiamo NEB (new England Biolabs):
http://www.neb.com/nebecomm/products/category1.asp?#2
Che fornisce una comoda funzione:
http://www.neb.com/nebecomm/DoubleDigestCalculator.asp?#.UIwlpIY5CuM

Poi puoi anche ragionarci un po' da te, ad esempio se hai in lab la tabella dei tuoi enzimi, ti guardi le condizioni relative di ognuno e vedi con quale T e quale buffer hai l'optimum di reazione.
Infine, se prendi enzimi "HF" nn hai il problema di compatibilità di buffer, perchè se nn erro funzionano tutti con lo stesso buffer (almeno x i NEB).