mi dite se la tecnica si fa così o io ho capito male? per localizzare un gene mediante mappa di restrizione e localizzazione mediante STS bisogna digerire DNA con enzimi di restrizione RARE CUTTING perchè questi tagliano raramente, mi daranno frammenti lunghi e quindi con meno difficoltà di doverli allineare. clono DNA ottenuto il BAC e poi trasformo le cellule con questi plasmidi. QUI NASCE LA MIA DIFFICOLTà: risulta conveniente clonare le STS per allineare la sequenza di DNA(ma non capisco perchè devo fare tutto questo) la tecnica prevede: utilizzo di primers che fiancheggiano le STS, e procedere a PCR. se due cloni amplificano per la stessa STS, significa che si sovrappongono in quella regione, e così ripetendo l'esperimento per le diverse STS e i diversi cloni ottengo la sequenza allineata(ma perchè devo fare ciò? a cosa mi serve? il prof ha ricapitolato tutte le tecniche che possono essere utili a localizzare un geno ma questa non ne vedo l'utilità anche se ho capito il concetto di COME ottenere questa mappa di contigs e del perchè biologico del risultato, ma lo scopo come lo realizzo? fatto tutto ciò cosa ne ricavo?)
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