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Autore

Discussione

prandoFDA
Nuovo Arrivato

Prov.: Brescia
Città: Botticino

17 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2012 : 15:55:50

buongiorno ricercatori!

sto subclonando l'ORF di un gene di 1500bp in due plasmidi diversi (uno per espressione eucariotica, l'altro è un costrutto lentivirale)

ho disegnato una coppia di primer a monte e a valle del sito di inserzione per verificare se l'inserto c'è o meno

col primo plasmide tutto bene: lo screening delle colonie ha generato dei prodotti di pcr di 400 bp (quindi senza inserto) e 1900 bp (con inserto!)

per il secondo plasmide invece non trovo nessun prodotto di pcr!

vedo solo il mio controllo positivo di reazione (cioè il plasmide originale) che generea un prodotto piccolo (circa 300 bp)

domanda: come è possibile che siano cresciute le colonie batteriche (che hanno quindi in qualche modo acquisito la resistenza all'ampicillina) se non trovo nessun prodotto di pcr?

life happens

domi84
Moderatore

Città: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2012 : 17:03:37

Di solito possono avvenire 2 cose:
- una quota del plasmide non si è tagliato
- una quota del plasmide si è tagliato con un solo enzima e quindi si è richiuso con la ligasi

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
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