inibitori fosfatasi in eccesso

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annatecnico
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2 Messaggi

Inserito il - 23 novembre 2012 : 11:13:34

Salve a tutti, avrei bisogno di consigli sull'utilizzo e stoccaggio degli inibitori delle fosfatasi. Ho preparato l'ortovanadato come da citazione "Gordon J (1991) Method enzymol"... preparazione lunga.. ho stoccato la provetta a +4 (1mese)

invece di congelare le aliquote!! lo posso utilizzare comunque?!
Seconda domanda: ho preparato il RIPA con NaF 50mM per omogenizzazione proteine tessutali e ho poi aggiunto a "fresco" i due cocktail Sigma inibitori fosfatasi e proteinasi nelle quantit� prescritte... essendoci gi� il NaF nel RIPA posso essere in eccesso di inibitori delle fosfatasi?

cosa puo portare questo "eccesso" per il futuro utilizzo dell'omogenato in WB? grazie mille dell'aiuto

romana87
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 23 novembre 2012 : 11:22:59

Ciao!
Dalla mia esperienza l'ortovanadato e' sempre meglio congelarlo in piccole aliquote e una volta scongelato generalmente non e' possibile ricongelarlo...io ti consiglierei di non usare quello tenuto a +4 per un mese...
Per quanto riguarda il RIPA io come protocollo standard aggiungevo freschi sia il NaF che i cocktail Sigma quindi non credo che tu sia in "eccesso" di inibitori...tieni presente che io lavoravo con le tirosin-fosfatasi.
Spero di esserti stata utile.
Un saluto

annatecnico
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 23 novembre 2012 : 11:38:12

Grazie. butter� l' Na3VO4... sob.. ma in effetti ero gi� su quella strada... ma sono contenta di non aver "pasticciato" 64 omogenizzazioni (rigorosamente in ghiaccio!!)fatte una alla volta per 20 min ciascuna.
mi sei stata molto utile!
di nuovo grazie
Ciao