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Nuovo Arrivato
Città: Viareggio
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 Inserito il - 28 gennaio 2013 : 14:55:32
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ciao a tutti; sto facendo degli esperimenti in laboratorio per valutare gli effetti, dal punto di vista dell'inibizione post-trascrizionale, di un particolare SNP.
Per questi esperimenti utiliziamo il plasmide pmirGLO, contenente sia la firefly luciferase (a valle della quale inseriamo la 3'utr di nostro interesse), sia la renilla luciferase, che utiliziamo come normalizzatore.
Secondo la nostra ipotesi di partenza, ci saremmo aspettati per le cellule trasfettate con il plasmide "wt" un raporto firefly/renilla più basso rispetto a quelle trasfettate con il plasmide con lo SNP e, in effetti, questo è quello che abbiamo visto nella maggior parte dei casi.
Ora però c'è un problema: in alcuni di questi esperimenti i valori risultano "invertiti", ovvero il mutante ha rapporti firefly/renilla significativamente più bassi rispetto al wt.
Sto cercando di capire da cosa possa dipendere, ma fin'ora senza successo.
Il protocollo di trasfezione utilizzato è sempre il solito, la lettura della luminescenza viene fatta sempre nello stesso modo, tramite un lettore di micropiastre. Non riesco a trovare alcun elemento di diversità fra gli esperimenti che mostrano risultati "opposti" (a parte, appunto, il risultato).
Mi chiedevo se qualcuno di voi si fosse mai imbattutto in un problema analogo e/o avesse qualche idea sulle possibili cause.
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Dual Luciferase Assay
Didattica
