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baffo92
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 Inserito il - 02 febbraio 2013 : 14:28:28
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Ciao a tutti sono nuovo del forum, innanzitutto vorrei fare i complimenti agli admin! Forum veramente utile e versatile :)
Vi espongo i miei dubbi/problemi, praticamente ho l'esame di Genetica tra 2 giorni e ho dei piccoli dubbi sull'identificazione in particolare del gene CF della fibrosi cistica tramite Chromosome Walking e Jumping.
Quello che ho capito è:
il gene della CF venne identificato grazie ad un particolare RFLP che, mediante analisi di linkage di alberi geneologigi, si vide essere associato alla malattia (gene CF). Ma ancora non si sapeva dove fosse questo gene. Grazie a questo RFLP si intuì che il gene CF era situato sul braccio lungo del cromosoma 7.
Ma ancora il pezzetto di cromosoma 7 era troppo grande per eventuali analisi, così dopo vari studi vennero identificati 2 marcatori (un noto protooncogene e un altro gene), così il campo venne ristretto a circa 1,5 Mb. Ma ancora non bastava, così successivamente vennero scoperti altri 2 polimorfismi associati al gene CF che restrinse ulteriormente il campo a 500 Kb.
Ora si potrebbe procedere o tramite CHROMOSOME WALKING o JUMPING.
Nel caso del WALKING si dovrebbe clonare il nostro marcatore (polimorfismo1), fatto a mo di sonda e fatto ibridare con una libreria genomica (fatta da frammenti del nostro Dna completo tagliato con diversi enzimi di rest). Questa nostra prima sonda trova un clone, la parte ultima di questo clone (che non si è ibridata con la sonda) viene usata x trovarne altri e così via fino ad arrivare al nostro gene d'interesse.
[Domanda 1: come faccio a sapere quando fermarmi? Cioè come so che sono arrivato al mio gene d'interesse?]
Ma nel caso del gene CF venne usato il JUMPING (in quanto c'era Dna ripetuto o cmq difficile da analizzare mediante walking) che consiste nel tagliare il nostro Dna (500 Kb tra i 2 polimorfismi) con enzimi di restrizione, circolarizzarli e tagliare il Dna tra le 2 estremità. Faccio a mo di sonda questo mio frammento contenenti le 2 estremità ora vicine del mio primo pezzo di cromosoma e lo saggio con altri frammenti precedentemente tagliati del mio Dna (500 kb), troverò un altro clone ecc ecc..
[Domanda 2: quando mi fermo?]
Se ho capito male qualche passaggio vi prego correggetemi, il mio prof è fissato con questa cavola di fibrosi..
Grazie a tutti e scusate per il lungo post :|
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