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valeriavaleria
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54 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2013 : 21:07:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valeriavaleria Invia a valeriavaleria un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
scusate ragazzi vorrei un aiuto:
ho effettuato una conta vitale su piastra e so che ho 3.5 10 elevato a 7 cellule per mL.
ho poi fatto una estrazione del genoma, quantificandolo al Nanodrop so che č 9.3 ng/ microlitro.
secondo voi quanto DNA contengono le cellule di partenza?????
valyyyyyyyy

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2013 : 21:56:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non sappiamo quanti mL di coltura hai utilizzato per l'estrazione e in quanti uL hai estratto il tuo DNA. Inoltre mancano dati circa l'efficienza dell'estrazione.

A ritroso comunque ragionerei cosė:

- concentrazione DNA x volume finale = totale DNA estratto

- volume di coltura utilizzato per l'estrazione x concentrazione batteri nella coltura = totale cellule

- totale DNA estratto : totale cellule x efficienza estrazione = DNA per cellula

con 0 < efficienza di estrazione < 1

Sul datasheet č un dato che deve essere riportato. Nel caso del mio kit (Quiagen) si aggira intorno allo 0,8.
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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valeriavaleria
Nuovo Arrivato




54 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2013 : 22:18:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valeriavaleria Invia a valeriavaleria un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
a me serve sapere quando DNA c'č in 3.5 10 elevato a 7 cellule.
cmq l'estrazione a partire da 1.5mL
volume totale DNA 50 microlitri
valyyyyyyyy
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0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2013 : 22:52:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Mi pare evidente che allora il calcolo si semplifichi a

volume finale estrazione x concentrazione DNA x efficienza x 2/3


Il significato di 2/3:
dici di aver utilizzato 1.5 mL, ma di voler sapere quanto DNA è contenuto in 3.5x10e7 cells, ossia in 1 mL. 1 mL è esattamente i 2/3 di 1.5 mL.


Mi pare che ora il procedimento sia chiaro, buoni calcoli.
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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