Western Blotting di gel colorati con coomassie colloidale

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AntonioSillo
Nuovo Arrivato

61 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 15:35:41

Ciao Ragazzi;
qualcuno di voi ha mai fatto il trasferimento di un gel di PA colorato con coomassie o coomassie colloidale? interferisce in qualche modo con l'ibridazione con anticorpi o con l'ECL?
sapete se bisogna cmq fissare al gel le proteine prima di colorare?
Grazie mille,
Sillo

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 18:27:26

Se fai una colorazione acquosa (non fissi le proteine!) puoi blottare il gel, altrimenti NO!

AntonioSillo
Nuovo Arrivato

61 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 21:13:47

Grazie per la risposta... ma non mi è molto chiara una cosa...
come posso colorare il gel se prima non fisso le proteine? se non le fisso, quando metto a bagno il gel nel coomassie se ne escono dalle maglie, e come se non bastasse la policrilammide ha un'indice di swelling abbastanza alto in acqua, quindi a maggior ragione le proteine se ne scappano.
ma tu l'hai mai fatto?
interferisce in qualche modo il coomassie con il trasferimento e l'ibridazione con anticorpi?