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Tisbe
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
 Inserito il - 18 maggio 2013 : 12:08:45
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Ciao a tutti!!!
Sto analizzando delle sezioni di cervello al microscopio confocale (Zeiss LSM 700 con Axioimager M2) Il software che sto usando (sempre Zeiss, le immagini sono salvate in formato.czi)permette di acquisire immagini contigue automaticamente, in modo da coprire una vasta area senza dover spostare l“obiettivo manualmente (funzione Tile).
Dato che sto analizzando l“hippocampo e mi serve distinguere tra le varie regioni (CA1, CA2,CA3 e DG)e tra dorsale e ventrale, questa funzione mi permetterebbe di risparmiare molto tempo e avere una corretta localizzazione( cosi“evito di confondere un CA3 con DG etc :-P) Il problema e“che la mia analisi consiste nel contare le cellule che esprimono il marker di interesse e misurare l“intensita“con cui questo e“espresso, ma con la tile function ottengo alcune immagini saturate e altre sottoesposte, per cui la misura di intensita“in queste non ha alcun significato. Dato che Intensita“, Gain, Pinhole etutti gli altri parametri devono essere gli stessi tra un immagine e lįltra per poterle confrontare, per evitare saturazione o sottoesposizione ho sempre aggiustato il fuoco manualmente, prendendo un immagine alla volta. Sapete se cé“un modo per fare si che il fuoco si aggiusti automaticamente o se cé“un valore di intensita“tale che in tutte le parti del mio campione le cellule siano nel range di esposizione corretto? Grazie mille!
Se non mi sono spiegata bene in alcune cose chiedete pure! :)
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chick80
Moderatore
Cittą: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 19 maggio 2013 : 20:42:36
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Sinceramente io eviterei proprio di misurare l'intensitą in IHC. Non č una tecnica veramente quantitativa... conta le cellule positive piuttosto e se vuoi fare una quantificazione fai, ad esempio, un Western blot.
Per quanto riguarda l'intensitą, il nostro microscopio lo fa in automatico quando fai un tile, ma č un sacco che non lo faccio... magari mi ricordo male. |
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Tisbe
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 19 maggio 2013 : 21:43:00
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Ti credo, ma la mia supervisor vuole misurare l'intensitą e tra l'altro č l'unica cosa in cui abbiamo trovato differenze significative tra gruppi in un'altra area del cervello, non posso proporle di lasciar stare...tra l'altro non sono nemmeno sicura di avere dei campioni per fare il western.
Che microscopio usate? Doevevi mettere qualche opzione perchč aggiustasse da solo l'esposizione?
Grazie! |
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