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Messaggio inserito da enrica

Salve a tutti,
sono una studentessa di biologia.
Sto svolgendo una tesi che prevede la mutagenesi di singoli aminoacidi in una proteina e sto utilizzando il kit Quikchange site-directed mutagenesis della Stratagene. Il cDNA di questa proteina č stato clonato nel vettore pIRESpuro2, il quale contiene anche la resistenza all'ampicillina.
Il mio problema č il seguente: dopo la trasformazione dei batteri con i costrutti ottenuti dalla PCR di mutagenesi ( dopo digestione di 2 h con DpnI) sulle piastre di LB broth+ Amp ottengo delle colonie ( il che mi fa presumere che in esse ci siano i plasmidi mutati o perlomeno quelli parentali).
Quando poi faccio una miniprep ( con il kit della Sigma) di queste colonie, non ottengo assolutamente nulla, nč i plasmidi mutati, nč quelli parentali!
Com'č possibile che questi batteri, che di per sč, non sono resistenti all'Amp, riescano a sopravviverci in assenza di alcun plasmide contenente la resistenza?
Sono sicura che l'ampicillina funzioni e che le aliquote di batteri in uso non possano essere state contaminate in alcun modo.
Grazie in anticipo per qualsiasi suggerimento!

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