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fede189
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 Inserito il - 09 giugno 2013 : 13:12:45
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scusate il papiello, ma sto impazzendo dietro a benzer e non ne esco. Vado per gradi:
Benzer scopre che tra i fagi T4 ce ne sono alcuni che danno placche di lisi più grandi e dai contorni più definiti rispetto al ceppo selvatico, ma soprattutto, che infettando questi ceppi in K12 questi non danno placche di lisi, il che li rende facilmente distinguibili dal selvatico. Ok, fin qui ci sono.
A questo punto si isola diversi mutanti, ognuno con una mutazione diversa ma portante lo stesso fenotipo. La mia prima domanda è:
come fa ad isolare mutanti diversi? per riconoscerli fa infezioni miste -> se sono diversi tra loro, infettando tramite infezione mista ad alta molteplicità di infezione e. coli B ci sarà qualche ricombinazione con formazione di doppi mutanti e selvatici, questi ultimi in grado di dare placche di lisi in K12, inoltre calcolandosi la concentrazione fagica della progenie venuta fuori da K12 e moltiplicandola per due può ottenere la frequenza di ricombinazione. ma è come si isola i mutanti diversi che mi sfugge.. so che è una domanda stupida, ma sono terrorizzata da ogni domanda a cui non mi so rispondere.
cmq Benzer si è isolato questi mutanti diversi, quindi prende ognuno di questi mutanti e li mette in beute diverse tutte contenenti E. Coli B, prende la progenie fagica e fa infettare K12. questo per vedere se retromutano e, nel caso, la frequenza di retromutazione: si rende conto che: 1 quando c'è è bassissima, 2 che alcuni mutanti non retromutano -> sono delezioni.
Poichè il suo obiettivo era mappare tutta la regione RII, decise di farlo sfruttando le mutazioni delezione, facendo infezioni miste tre loro in E. Coli B: se le delezioni si sovrapponevano non potevano dare il selvatico e quindi placche di lisi in k12. domanda numero 2. Posso effettivamente scoprire se le delezioni si sovrappongono o meno, quindi se sono o meno nella stessa regione, ma non so la regione di cui si tratta, come faccio ad ordinarle? o mi sono persa in qualche passaggio?
Ovviamente l'ultimo passaggio è il test di complementazione:
Mappata tutta la regione Benzer si chiede se è costituita da un unico gene o se quelli che interagiscono tra loro dando lo stesso fenotipo sono due geni, quindi mette su un test di complmentazione:
Infettando E.coli K12 con due fagi RII-
se questi due hanno mutazioni diverse ma sullo stesso gene non daranno mai lisi in k12, viceversa, se effettivamente ci sono due geni (A e B) ed ogni mutante ha la mutazione in un gene questi complementano: iL mutante 1, avente mutazione in A, sarà in grado di dare il prodotto di B; il mutante 2, avente mutazione in B, sarà in grado di dare il prodotto di A.. in questo modo sarà possibile provocare la lisi.
Le particolarità che dimostra che effetivamente è complementazione e non ricombinazione sono 2:
Innanzitutto in questo modo le placche di lisi saranno molte di più che in caso di ricombinazione -> quando avviene complementazione complementeranno tutti, se la lisi avviene per ricombinazione, avverrà solo per quei pochi fagi selvatici venuti fuori dall'incrocio dei due mutanti..
punto due, la progenie fagica di questa complementazione sarà ovviamente tutta parentale, quindi o mutante in A o mutante in B
è così giusto? vi prego ditemi che è così xD
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L'incubo della genetica: Benzer
