Ombre nellímmunoistochimica

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Tisbe
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10 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2013 : 15:46:00

Ciao a tutti!!!
Ho fatto una tripla immunoistochimica su sezioni di cervello di topo ma le mie sezioni al vetrino presentano ombre nette. Ad esempio se guardo al microscopio con GFP vedo un verde brillante nella regione della corteccia e poi un verde molto piu´scuro nel Caudoputamen, come se ci fosse un´ombra. Il passaggio tra le due intensita´del colore e´una linea netta, che non segue assolutamente nessuna regione anatomica. Stessa situazione anche con altre sezioni, ma non tutte. In alcune la colorazione e´forte ed omogenea per tutta la sezione. Avete mai avuto questo problema? Da cosa e´dato? Non si tratta di bleaching perche´le sezioni non erano ancora state esposte al laser e sono sempre stata attenta a non esporle alla luce (gli anticorpi secondari sono poi cognugati con Alexa Fluor, quindi sono cmq piuttosto resistenti al bleaching). Puo´essere dovuto ad una distribuzione non omogenea del Mounting Medium? Uso un Invitrogen ProLong AntiFade reagent.
Grazie mille!!!!! :)

Tisbe
Nuovo Arrivato

10 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2013 : 23:45:28

nessun suggerimento? Se qualcuno ha idea di cosa possa essere successo me lo dice che sto facendo un'immuno proprio in questi giorni e passerò a montare le sezioni mercoledi'...se potessi evitare di trovarmi di nuovo con ombre sarebbe gran cosa! :D