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pasticciotta
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
 Inserito il - 29 settembre 2013 : 15:45:49
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Ciao a tutti!
ho bisogno di un chiarimento e so che il popolo di molecular lab mi può aiutare.
Dunque ho un problema con le diluizioni seriali. Premetto che ho già consultato la sezioni "calcoli di laboratorio" ma la mia richiesta è più specifica.
Dunque ho bisogno di calcolare delle diluizioni seriali partendo da volumi, ovvero io ho una soluzione madre e devo calcolare delle diluizioni seriali 1:10-1:20-1:40-1:80 ecc. ma il volume di ogni soluzione non deve essere inferiore a 200ul...mi aiutate per favore?
Qual è il volume che devo trasferire da una provetta all'altra ad ogni passaggio?
Perché se io volessi diluire la soluzione madre 1:10 volendo preparare 200ul di volume totale allora devo prelevare 20ul dalla madre ed aggiungere 180ul di diluente...e fin qui ci siamo!
Però se applico lo stesso ragionamento e volessi trasferire dalla soluzione diluita 1:10 un certo volume per diluirla 1:20 (quindi sarebbe una dluizione 1:2) dovrei trasferire 100ul della soluzione 1:10 ed aggiungerne altri 100 per arrivare al volume totale di 200ul...ma poi nella provettina diluita 1:10 rimarrebbero solamente 100ul ed invece a me servirebbe che in tutte le provette della diluizione seriale ci fossero 200ul!!!
Non so se sono stata chiara ...mi aiutate please???
Grazie a tutti
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 29 settembre 2013 : 19:37:12
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Il tuo ragionamento è corretto.
Il trucco sta nel tenere conto del volume necessario per preparare la soluzione successiva.
La cosa più semplice è partire dall'ultima diluizione, diciamo 1:80
Per preparare 200ul di 1:80 hai bisogno di 100ul di 1:40, a cui bisogna aggiungere i 200ul che ti servono per il tuo esperimento, quindi 300ul totali.
Per preparare questi 300ul di 1:40 avrai bisogno di 150ul di 1:20, più i 200ul per l'esperimento avrai 350ul totali.
Per preparare 350ul di 1:20 hai bisogno di 175ul di 1:10, quindi 175+200=375ul totali
Quindi prepari 375ul di 1:10, ne usi 175ul per preparare 350ul di 1:20, ne usi 150ul per preparare 300ul di 1:40, e infine ne usi 100ul per preparare 200ul di 1:80
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pasticciotta
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 02 ottobre 2013 : 19:27:44
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Ok...dunque posso fare un esempio per vedere se ho capito?
Supponiamo di voler calcolare le soluzioni seriali 1:5-1:10-1:20-1:40-1:80-1:160 e che per ogni soluzione me ne servono 100ul.
Dovrei cominciare dall'ultima soluzione, ovvero dalla diluzione 1:160.
Quindi per avere 100ul della soluzione 1:160 devo prendere 50ul di soluzione 1:80+ 50ul di diluente.
Per la soluzione 1:80 quindi devo aggiungere ai 50ul (da trasferire alla soluzione 1:160) i 100ul dell'esperimento, per un totale di 150ul. Quindi per preparare 150ul di soluzione 1:80 ho bisogno 75ul di soluzione 1:40+75ul di diluente.
A questo punto il volume totale della soluzione 1:40 sarà 175ul (75ul+100ul).
Per preparare 175ul di soluzione 1:40 avrò bisogno di 87,5ul della soluzione 1:20+87,5 di diluente.
il volume totale della soluzione 1:20 dovrà essere 187,5ul!!
Per prepararli avrò bisogno di 93,75ul di soluzione 1:10+ 93,75ul di diluente.
La soluzione 1:10 dovrà avere un volume tot di 193,75, giusto?
Per preparali ho bisogno della metà, ovvero 96,875 di soluzione 1:5+altra metà di diluente. Il totale della soluzione 1:5 dovrà essere 196,875.
Per preparare invece una diluizione 1:5 dalla madre, avendo come volume tot 196,875 dovrò prendere 39,375 di SS+157,5 di diluente
è corretto???
grazie infinitamente grazie!!! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 02 ottobre 2013 : 21:30:23
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Sì, il ragionamento è correttissimo! Adesso, finita la teoria... in pratica la cosa migliore è preparare 200 ul di tutte le soluzioni 
In questo modo hai 200ul di 1:5, ne prendi 100 per fare 200ul di 1:10 e gli altri 100 per l'esperimento e così via. |
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pasticciotta
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2013 : 18:29:55
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Ok...ma poi trasferendo i 100ul da 1:5 a 1:10 nella provetta della soluzione con diluizione 1:5 ne rimarebbero 100ul invece che di 200ul...ti torna?
Per quanto riguarda il test ELISA, per fare le diluizioni seriali vale la stessa cosa?
Ovvero...io devo avere per esempio 100ul per ogni pozzetto...parto da un pozzetto diluito 1:10 e devo fare una titolazione per es. 1:100, 1:1000 ecc. come faccio in questo caso??? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2013 : 18:53:58
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Ah, te ne servivano 200 per l'esperimento? Scusa, avevo fatto i calcoli con 100...
Ad ogni modo è lo stesso, ne fai 400ul in quel caso e sei a posto.
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diluizioni seriali...ma con volume noto
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