Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
 Inserito il - 11 ottobre 2013 : 11:39:49
|
|
ciao ragazzi,ho fatto un esperimento per valutare i livelli di un recettore presente su cellule tumorali (ErbB2) . Le cellule sono state lisate e i lisati li ho usati per fare il western blotting, ho usato un anticorpo anti ErbB2 seguito da un secondario e l'anti-actina per fare una normalizzazione. non ho capito,però,perchè si fa questa normalizzazione,e perchè proprio con l'anti-actina... grazie mille !
|
|
|
|
|
Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 13 ottobre 2013 : 23:35:14
|
L'actina, così come molti altri geni spesso utilizzati nella normalizzazione, è un gene housekeeping, cioè un gene espresso costitutivamente e che si suppone non vari la sua espressione in condizioni, tempi e/o eventi diversi.
Rapportare il contenuto di una proteina in studio con quello di un housekeeping permette di capire le effettive variazioni della proteina di interesse, eliminando poi anche il rischio di errori dovuti all'operatore.
Ad esempio, nel western tu carichi sul gel un tot microgrammi di proteine costante per ogni campione, ma ovviamente c'è sempre il rischio che tra i vari campioni le quantità caricate siano un po' diverse (vuoi per errori di pipettaggio, vuoi per un dosaggio non precisissimo, ecc..), oppure può capitare che il trasferimento non avvenga in maniera identica su tutti i campioni, ecc..
Quindi, quando tu visualizzi la tua proteina di interesse, se non utilizzassi un housekeeping (che sai che non varia), chi ti dice che le differenze tra il campione A e quello B non siano dovute ad un qualsiasi errore durante il protocollo?
Se ad esempio infatti hai caricato più campione A che B, anche l'housekeeping in A risulterà maggiore di quello in B, e quindi solo rapportando la proteina di interesse al tuo normalizzatore, otterrai un valore che ti permette di minimizzare questo tipo di errore. |
 
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
 |
|
|
roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2013 : 18:00:55
|
| grazie mille,mi sei stato di immenso aiuto! |
|
|
|
Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 21 ottobre 2013 : 09:05:53
|
Citazione:
Messaggio inserito da roselady
grazie mille,mi sei stato di immenso aiuto!
Prego! Felice di esserti stato d'aiuto.
Se hai altri dubbi, chiedi pure! |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
western blotting e anti-actina
Didattica e Relazioni
