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BiotechSo
Nuovo Arrivato
Prov.: Reggio Emilia
26 Messaggi |
 Inserito il - 31 ottobre 2013 : 15:00:37
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Ciao a tutti.
Sto usando un kit (fluorimetrico) per misurare la concentrazione di pirofosfato (PPi) nel medium di coltura di cellule murine. La curva standard che si ottiene non è lineare come nel caso di un ELISA ma ad andamento sigmoide; per questo motivo, se voglio analizzare i miei dati finali non ho a disposizione un'equazione di una retta con intercetta e pendenza.
Sapreste dirmi, in caso di curva standard sigmoide, come si fa a calcolare i risultati finali, partendo dalla densità ottica misurata per i miei campioni?
Grazie mille a chi mi dedichera' un po' di tempo.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 31 ottobre 2013 : 20:40:54
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Beh veramente anche negli ELISA le curve non sono rette ma sono logistiche a 4 o 5 parametri (generalmente sigmoidi), solo che spesso per semplificare si tende a fare il test in un range ristretto in cui l'andamento è lineare per semplificare con una regressione lineare.
Comunque in genereale nei test biologici (non solo ELISA) la curva "sigmoide", quella che si adatta in genere meglio ai dati e piú utilizzata è la 4 parametri (4PL) (la 5PL è un po' più complessa).
Ora se hai un programma, tipo quelli che ci sono con il lettore di piastre che ti fa il curve fitting è decisamente meglio, altrimenti devi farti i conti tu.
Ci sono sicuramente anche programmi che lo fanno in rete, ma non li conosco io uso quello del lettore di piastra.
Informazioni generali sulla 4PL e il suo uso le trovi qui:
http://www.miraibio.com/blog/2010/08/the-4-parameter-logistic-4pl-nonlinear-regression-model/
hanno anche il loro software, ma personalmente non lo conosco, però le pagine dove ti spiegano la regressione e i tipi di curve sono scritte molto bene. |
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