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Irene88
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 28 novembre 2013 : 12:04:39
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Ciao a tutti, chiedo aiuto qui perchč non ho trovato risposte al mio probema da nessuna parte e magari a qualcuno č giā successo. Faccio western blot da quasi 2 anni ma questa ancora non mi era mai successa: ho corso due gel manuali in parallelo, campioni da due colture cellulari diverse estratte con lo stesso metodo, poi blocking, anticorpo (per una proteina fosforilata), secondario tutto uguale per i due gel. Uno si č sviluppato benissimo, una singola banda netta e il resto pulito, l'altra membrana un sacco di bande aspecifiche e mi si č sviluppato anche il marcatore (Rainbow)! Avete idea di cosa possa essere successo? Vi č mai capitato? Grazie in anticipo
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lā
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 28 novembre 2013 : 13:46:19
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| Forse il blocco della seconda membrana č andato male |
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Luis 22
Utente
Cittā: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 29 novembre 2013 : 00:09:40
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Quindi i due gel erano identici, giusto? Stesso anticorpo?
Se č cosė, probabilmente come giā detto potrebbe essere un problema nel blocking. Magari la membrana non era ben coperta e l'anticorpo (era policlonale?) poi ha cross-reagito con un po' di roba, marker compreso. |
 
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine č vivere, sfogliarli a caso č sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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Western blot - si sviluppa il marker
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