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Biotech_is_PNA
Utente Junior
Cittā: Parma
123 Messaggi |
 Inserito il - 21 gennaio 2014 : 15:08:53
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Provo a rispondere anche se č tanto che non ho a che fare con la biologia molecolare.
Dovresti avere un'origine di replicazione procariotica per ingegnerizzare e arricchire in copy number.
Dovresti avere un selettore positivo (tipo amp+) per selezionare i procarioti che hanno acquisito il vettore.
Semini i procarioti trasformati. Le colonie che hanno ricevuto il vettore col transgene (e non il vettore vuoto) vengono individuate facendo delle restrizioni di controllo, per cui non ti serve un altro selettore procariotico.
Il promotore del transgene deve essere eucariotico e tra le altre cose dovrebbe contenere la seq. di Kozak. Il transgene, se non modifica lui direttamente il fenotipo degli eucarioti, dovrebbe contenere un selettore eucariotico, magari espresso tramite IRES.
A seconda del tipo di organismo a cui il vettore navetta č destinato, č necessaria una appropriata origine di replicazione (eucariotica) e probabilmente sequenze "stabilizzatrici" (gli eucarioti non hanno plasmidi o ne hanno pochi, per cui bisogna ingannare la cellula prendendo accorgimenti particolari a seconda dell'organismo per fargli mantenere il plasmide, facendogli credere che sia un cromosoma oppure scopiazzando le strategie dei virus).
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