anticorpi monoclonali e western blot

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Shadow86
Nuovo Arrivato

32 Messaggi

Inserito il - 17 gennaio 2014 : 09:32:01

Scritto da MolecularLab Mobile

Sto preparando l'esame di biotecnologie farmacologiche e ho un dubbio riguardo alla produzione di anticorpi monoclonali con la metodica degli ibridomi e in particolare sullo screening degli ibridomi per individuare quali producono gli anticorpi verso l'antigene di nostro interesse. Il professore ha detto che si utilizzano a questo scopo o l'ELISA indiretto (per cui non ho problemi) o il western blot. Riguardo quest'ultimo dopo l'sds-page e il transfer su carta di nitrocellulosa come avviene la colorazione con anticorpi primario secondario nel caso degli anticorpi monoclonali? Si mette direttamente il secondario legato all'enzima? e l'antigene non si aggiunge? Il mio dubbio viene dal fatto che nel caso della produzione di anticorpi le proteine che sto separando sono gi� anticorpi. Grazie mille in anticipo!

0barra1
Utente Senior

Citt�: Paris, VII�me arrondissement

3847 Messaggi

Inserito il - 17 gennaio 2014 : 21:59:34

Carichi l'antigene nel SDS-PAGE gel, corri, trasferisci su membrane tramite WB, blocchi con latte, incubi con l'anticorpo che vuoi testare, lavi per eliminare o ridurre il binding aspecifico, incubi con un secondario coniugato per es. ad una perossidasi, lavi ancora, aggiungi un substrato per la perossidasi e sviluppi.
Pregando di avere il segnale li' dove ti aspetti che sia la tua proteina.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss