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Fenilalanina88
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3 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2014 : 10:21:39

Salve a tutti, ho un problema con la gel filtrazione.
Sto studiando la gel filtrazione e in particolare l�applicazione di questa tecnica per studiare l�interazione proteina ligando. Per questa particolare applicazione, devo equilibrare la mia colonna con il ligando in maniera tale che sia la fase mobile che stazionaria abbiano la stessa concentrazione di ligando, applico la mia proteina, la proteina essendo grande utilizzer� solo il V0. Otterr� due picchi uno positivo che rappresenta il complesso proteina- ligando e ligando libero ed uno negativo cio� ligando libero meno il complesso proteina �ligando. Ora la mia domanda � : perch� nel picco positivo ho anche il ligando libero e che significa che il picco negativo rappresenta il ligando meno il complesso proteina-ligando? Spero di essere stata chiara.

midichloria
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75 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2014 : 12:46:53

Non ho capito molto bene la tua domanda, ma spero di averla interpretata nel modo che tu intendevi....
La cromatografia per gel filtrazione o cromatografia ad esclusione molecolare permette di separare molecole in base alle loro dimensioni e quindi alla loro accessibilit� o meno ai pori della fase stazionaria. Una molecola che non ha accesso alla fase stazionaria verr� eluit� molto pi� velocemente di una molecola che riesce ad entrare nei pori della fase stazionaria e il cui flusso � quindi ritardato rispetto a quello della fase mobile.
Nel caso di un complesso tra due proteine (proteina+ligando) questo sar� molto pi� grande della proteina o del ligando da soli... quindi verr� eluito per primo.
Non so se era questo che stavi chiedendo a meno :)

Fenilalanina88
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2014 : 16:27:27

Grazie per la tua risposta. Forse non sono stata chiara, ma sto studiando dai miei appunti perch� n� sul libro n� su internet ho trovato maggiori dettagli. Io ho capito che essendo pi� grande il complesso proteina-lidando verr� eluita per prima. Quello che proprio non ho capito �: perch� nel profilo di eluizione di una proteina che interagisce con il ligando ho un picco positivo dove c'� il complesso proteina-ligando e il ligando libero? perch� il ligando libero in questo picco? e poi perch� ho un picco negativo? (sulle slide c'� scritto che corrisponde alla concentrazione di ligando libero meno la concentrazione di ligando sottratto nel passaggio della proteina attraverso la fase mobile).

midichloria
Nuovo Arrivato

75 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2014 : 19:01:32

Se il picco negativo corrisponde al ligando che � rimasto libero non legato dalla proteina.... allora come fa ad esserci scritto che nel picco positivo oltre al complesso proteina-ligando c'� anche il ligando libero? Il ligando libero � sempre lo stesso... non mi spiego perch� sia in due picchi.... mi dispiace non saperti dare una risposta ma non riesco proprio a capire!!! :( pu� essere che sia un errore delle slides?

Fenilalanina88
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 25 gennaio 2014 : 15:00:13

no, non penso che sia un errore delle slide. Avevo trovato un file in internet che riguardava l'argomento ma non riesco ad inserirlo. Grazie comunque

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