Oligomeri costruzione curva standard

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ElyKik
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Inserito il - 28 gennaio 2014 : 11:05:11

Ciao a tutti! Ho ponderato lungamente sul fatto di scrivere o no... Ma sono davvero disperata!

Il problema riguarda la preparazione di oligomeri standard per la costruzione di una curva standard in real time qPCR. Mi � arrivata come consuetudine una provetta con una polvere liofilizzata di oligomeri di 84 bp, sono standard complementari alla sequenza telomerica.

Il data sheet mi dice che devo aggiungere 108 ul di H2O per avere una soluzione a 100 pmol/ul. Il suo peso molecolare espresso in g/mol � 23267, anche questo scritto nel datasheet.

L'unico materiale di cui dispongo � un protocollo lungo una pagina di un prof con cui dovremmo collaborare che mi dice come fare per avere un risultato espresso in numero di copie da cui partire come diluizione pi� concentrata e fare poi le altre.

Il procedimento del prof dice cos�:
- calcola il peso di 1 molecola (1 oligomero) con la formula peso molecolare/num Avogadro
- dice che la concentrazione pi� alta � di 60pg MA IO NON LO SO QUANTO PESA!!!!!!!!
quindi come faccio a saperlo?

Questo mi serve perch� il passaggio successivo sar� quello di dividere il peso totale di tutte le molecole presenti nella soluzione/peso di una molecola per sapere QUANTE SONO LE MOLECOLE NELLA SOLUZIONE PI� CONCENTRATA!

Ho gi� scritto a questa persona per chiedere delucidazioni ma non mi ha neppure risposto (dopo vari solleciti), in pi� ho "rotto le scatole" a vari colleghi/colleghe ma niente...

Grazie in anticipo per l'aiuto!