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Autore Discussione  

Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 25 febbraio 2007 : 15:55:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi c'è qualkuno ke ha digerito con questo enzima e poi clonato?
Farah

AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Città: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 25 febbraio 2007 : 17:07:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si perkè?
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biomol
Nuovo Arrivato



65 Messaggi
Inserito il - 26 febbraio 2007 : 12:58:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biomol Invia a biomol un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si anche io.ovviamento se il tuo problema è che il clonaggio non è andato bene,può dipendere dal vettore o da altri cento fattori....
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Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 26 febbraio 2007 : 14:29:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si il problema è il clonaggio..ma mi hanno detto (dopo aver escluso un casino di possibili errori) ke il problema potrebbe essere nella digestione con questo enzima..allora mi kiedevo se x caso ci potesse essere un protocollo particolare di cui magari nn sono a conoscenza...
Farah
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AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Città: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 26 febbraio 2007 : 14:41:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
io l'ho sempre usato tranquillamente in double digestion con HInd III in buffer B Roche (se non sbaglio è il 4 NEB) per uno o due ore a 37°C ed ha sempre fatto il suo dovere... se hai paura che sia l'enzima prova ad usarne da un altro stock (magari te lo fai prestare dal lab affianco!)

good luck!
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biomol
Nuovo Arrivato



65 Messaggi
Inserito il - 26 febbraio 2007 : 16:52:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biomol Invia a biomol un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
scusa ma tu non controlli che la digestione sia avvenuta prima di passare al clonaggio?è una cavolata ma ti fa escludere una serie di problemi e poi ti risparmia tempo.comunque io l'ho sempre usato ma devi considerare che tipo di vettore hai e anche l'altro enzima se tagliano con estremità blant o sticki,forse devi fare qualche reazione tipo chinasi.ti assicuro che per questo enzima non esiste nessun particolare protocollo.
ciao
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Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2007 : 19:28:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Certo! La digestione la corro sempre sul gel e nn ho problemi in tal senso...! Io uso PGL3 come vettore...(circa 3000pb) i miei inserti sono 200pb..taglio con un singolo enzima..quindi solo con XbaI..ho provato a fare vari rapporti x la ligasi..ma nulla...! Mi viene da piangere!
Farah
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RNA world
Utente Junior

dna



370 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2007 : 22:34:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RNA world Invia a RNA world un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Prendi il catalogo dell'azienda che produce il tuo enzima (ad. esempio la Fermentas) e leggi le specifiche che dicono loro...

cmq non ho capito bene che problema ti si presenta... semplicemente non riesci a clonare l'inserto?


ciao
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Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 01 marzo 2007 : 18:24:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Semplicemte si !
Farah
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Biochica
Utente Junior




285 Messaggi
Inserito il - 07 marzo 2007 : 12:48:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biochica Invia a Biochica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!
Anch'io ho usatp XbaI senza nessun problema (io l'ho usato pure scaduto...e ha funzionato...), sei certa che il problema non possa derivare dalla ligasi? hai verificato tutte le condizioni?
Chiara
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit-
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