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prezzemolina83
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 Inserito il - 18 aprile 2014 : 11:50:32
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Salve a tutti, prima volta che scrivo in questo forum. Sono alle prime prese con immunoprecipitazione su lisato linfocitario e poiché lo scopo è quello di fare una bidimensionale sull'IP ho bisogno di quantificarlo prima di fare wb di controllo. I problemi sono i seguenti:
-fatto il primo immunoprecipitato, con dynabeads protein G non cross-linkate al Ab, ed eluito con glicina 1M a ph 3.5 per non denaturare e poter dosare, dopo Bradford non ho dosato alcunché
-proverei a buttare tutto su gel e fare wb ma l'anticorpo con cui rilevare la banda è lo stesso con cui ho immunoprecipitato (l'unico che finora ha funzionato negli exp)e la mia proteina va a piazzarsi intorno ai 25 KDa proprio come le light chains degli anticorpi.....
-mi son state riportate voci secondo cui alle volte in wb si ritrova anche la proG....vi risulta? in tal caso....saturare con latte+ig totali diverse da quelle dell'anticorpo usato, ovviamente?
Avete suggerimenti?
Buona giornata a tutti!
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immunoprecipitazione
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