Salve, avrei bisogno di un consiglio. Se volessi eseguire in un'unica volta l'amplificazione di più sequenze, come faccio ad ottimizzare le condizioni in modo che tutti i primer funzionino alla stessa temperatura di annealing? Io ho già i primer per i vari frammenti, ma con temperature di annealing che variano dai 55°C ai 60°C. Devo necessariamente scegliere altri primer o posso intervenire su altri fattori, affinché io possa utilizzare per tutti la stessa temperatura e lo stesso numero di cicli?
Citazione: Devo necessariamente scegliere altri primer o posso intervenire su altri fattori, affinché io possa utilizzare per tutti la stessa temperatura e lo stesso numero di cicli?
Devi disegnare dei nuovi primer con la stessa temperatura di annealing. L'alternativa è scegliere la temperatura più bassa, ma si possono creare degli amplificati aspecifici.